![Виды микроорганизмов классификация строение. Классификация бактерий по типу питания. Распространение бактерий в природе и их роль в круговороте веществ](https://i2.wp.com/vmede.org/sait/content/Mikrobiologija_3verev_2010_t1/2_files/mb4_004.jpeg)
Микроорганизмы - это организмы, невидимые невооруженным глазом из-за их незначительных размеров.
Критерий размера - единственный, который их объединяет.
В остальном мир микроорганизмов еще более разнообразен, чем мир макроорганизмов.
Так же как для растений и животных, для названия микроорганизмов применяется бинарная номенклатура, т. е. родовое и видовое название.
Если видовую принадлежность исследователям определить не удается и определена только принадлежность к роду, то употребляется термин species. Чаще всего это имеет место при идентификации микроорганизмов, имеющих нетрадиционные пищевые потребности или условия существования. Название рода обычно либо основано на морфологическом признаке соответствующего микроорганизма (Staphylococcus, Vibrio, Mycobacterium), либо является производным от фамилии автора, который открыл или изучил данный возбудитель (Neisseria, Shig-ella, Escherichia, Rickettsia, Gardnerella).
Видовое название часто связано с наименованием основного вызываемого этим микроорганизмом заболевания (Vibrio cholerae - холеры, Shigella dysenteriae - дизентерии, Mycobacterium tuberculosis - туберкулеза) или с основным местом обитания {Escherihia coli - кишечная палочка).
Кроме того, в русскоязычной медицинской литературе возможно использование соответствующего русифицированного названия бактерий (вместо Staphylococcus epidermidis - эпидер-мальный стафилококк; Staphylococcus aureus - золотистый стафилококк и т. д.).
включает в себя отдел цианобактерий и отдел эубактерий, который, в свою очередь, подразделяется на порядки:
Порядки подразделяются на группы.
Наиболее известны :
F-плазмиды, обеспечивающие конъюгационный перенос
между бактериями;
R-плазмиды - плазмиды лекарственной устойчивости, обеспечивающие циркуляцию среди бактерий генов, детерминирующих устойчивость к используемым для лечения различных заболеваний химиотерапевтическим средствам.
Прокариотические, преимущественно одноклеточные микроорганизмы, которые могут также образовывать ассоциации (группы) сходных клеток, характеризующиеся клеточными, но не организменными сходствами.
Дальнейшая дифференциация групп на семейства, рода и виды, которые являются основной таксономической категорией, проводится на основании изучения биохимических свойств. Этот принцип положен в основу классификации бактерий, приведенной в специальных руководствах - определителях бактерий .
Вид является эволюционно сложившейся совокупностью особей, имеющих единый генотип, который в стандартных условиях проявляется сходными морфологическими, физиологическими, биохимическими признаками.
Для патогенных бактерий определение «вид» дополняется способностью вызывать определенные нозологические формы заболеваний.
В микробиологии широко применяют специальные термины - культура, штамм, клон.
Культура - это видимая глазом совокупность бактерий на питательных средах.
Культуры могут быть чистыми (совокупность бактерий одного вида) и смешанными (совокупность бактерий 2 или более видов).
Штамм - это совокупность бактерий одного вида, выделенных из разных источников или из одного источника в разное время.
Штаммы могут различаться по некоторым признакам, не выходящим за пределы характеристики вида. Клон - это совокупность бактерий, являющихся потомством одной клетки.
2.1. Систематика и номенклатура микробов
Мир микробов можно разделить на клеточные и неклеточные формы. Клеточные формы микробов представлены бактериями, грибами и простейшими. Их можно называть микроорганизмами. Неклеточные формы представлены вирусами, вироидами и прионами.
Новая классификация клеточных микробов включает следующие таксономические единицы: домены, царства, типы, классы, порядки, семейства, роды, виды. В основу классификации микроорганизмов положены их генетическое родство, а также морфологические, физиологические, антигенные и молекулярнобиологические свойства.
Вирусы нередко рассматриваются не как организмы, а как автономные генетические структуры, поэтому они будут рассмотрены отдельно.
Клеточные формы микробов разделены на три домена. Домены Bacteria и Archaebacteria включают микробы с прокариотическим типом строения клетки. Представители домена Eukarya являются эукариотами. Он состоит из 4 царств:
Царства грибов (Fungi, Eumycota);
царства простейших (Protozoa);
царства Chromista (хромовики);
Микробов с неуточненным таксономическим положением (Microspora, микроспоридии).
Различия в организации прокариотической и эукариотической клеток представлены в табл. 2.1.
Таблица 2.1. Признаки прокариотической и эукариотической клетки
2.2. Классификация и морфология бактерий
Термин «бактерия» происходит от слова bacterion, что означает палочка. Бактерии относятся к прокариотам. Их разделяют на два домена: Bacteria и Archaebacteria. Бактерии, входящие в домен Archaebacteria, представляют одну из древнейших форм жизни. Они имеют особенности строения клеточной стенки (у них отсутствует пептидогликан) и рибосомальной РНК. Среди них отсутствуют возбудители инфекционных заболеваний.
Внутри домена бактерии подразделяются на следующие таксономические категории: класс, тип, порядок, семейство, род, вид. Одной из основных таксономических категорий является вид (species). Вид - это совокупность особей, имеющих единое происхождение и генотип, объединенные по близким свойствам, отличающим их от других представителей рода. Название вида соответствует бинарной номенклатуре, т.е. состоит из двух слов. Например, возбудитель дифтерии пишется как Corynebacterium diphtheriae. Первое слово - название рода и пишется с прописной буквы, второе слово обозначает вид и пишется со строчной буквы.
При повторном упоминании вида родовое название сокращается до начальной буквы, например C. diphtheriae.
Совокупность однородных микроорганизмов, выделенных на питательной среде, характеризующихся сходными морфологическими, тинкториальными (отношение к красителям), культуральными, биохимическими и антигенными свойствами, называется чистой культурой. Чистая культура микроорганизмов, выделенных из определенного источника и отличающихся от других представителей вида, называется штаммом. Близким к понятию «штамм» является понятие «клон». Клон представляет собой совокупность потомков, выращенных из единственной микробной клетки.
Для обозначения некоторых совокупностей микроорганизмов, отличающихся по тем или иным свойствам, употребляется суффикс «вар» (разновидность), поэтому микроорганизмы в зависимости от характера различий обозначают как морфовары (отличие по морфологии), резистентовары (отличие по устойчивости, например, к антибиотикам), серовары (отличие по антигенам), фаговары (отличие по чувствительности к бактериофагам), биовары (отличие по биологическим свойствам), хемовары (отличие по биохимическим свойствам) и т.д.
Раньше основу классификации бактерий составляла особенность строения клеточной стенки. Подразделение бактерий по особенностям строения клеточной стенки связано с возможной вариабельностью их окраски в тот или иной цвет по методу Грама. Согласно этому методу, предложенному в 1884 г. датским ученым Х. Грамом, в зависимости от результатов окраски бактерии делятся на грамположительные, окрашиваемые в сине-фиолетовый цвет, и грамотрицательные, окрашиваемые в красный цвет.
В настоящее время основу классификации составляет степень генетического родства, основанная на изучении строения генома рибосомных РНК (рРНК) (см. главу 5), определении процентного содержания в геноме гуанинцитозиновых пар (ГЦ-пары), построении рестрикционной карты генома, изучении степени гибридизации. Также учитываются и фенотипические показатели: отношение к окраске по Граму, морфологические, культуральные и биохимические свойства, антигенная структура.
Домен Bacteria включает 23 типа, из которых медицинское значение имеют нижеизложенные.
Большинство грамотрицательных бактерий объединены в тип Proteobacteria (по имени греческого бога Proteus, способного принимать различные облики). Тип Proteobacteria подразделен на 5 классов:
Класс Alphaproteobacteria (роды Rickettsia, Orientia, Erlichia, Bartonella, Brucella);
класс Betaproteobacteria (роды Вordetellа, Burholderia, Neisseria, Spirillum);
Класс Gammaproteobacteria (представители семейства Enterobacteriaceae, роды Francisella, Legionella, Coxiella, Pseudomonas, Vibrio);
Класс Deltaproteobacteria (род Bilophila);
Класс Epsilonproteobacteria (роды Campilobacter, Helicobacter). Грамотрицательные бактерии входят также в следующие типы:
тип Chlamydiae (роды Chlamydia, Chlamydophila), тип Spirochaetes (роды Spirocheta, Borrelia, Treponema, Leptospira); тип Bacteroides (роды Bacteroides, Prevotella, Porphyromonas).
Грамположительные бактерии входят в следующие типы:
Тип Firmicutes включает класс Clostridium (роды Clostridium, Peptococcus), класс Bacilli (Listeria, Staphylococcus, Lactobacillus, Streptococcus) и класс Mollicutes (роды Mycoplasma, Ureaplasma), которые являются бактериями, не имеющими клеточную стенку;
тип Actinobacteria (роды Actinomyces, Micrococcus, Corynebacterium, Mycobacterium, Gardnerella, Bifidobacterium, Propionibacterium, Mobiluncus).
2.2.1. Морфологические формы бактерий
Различают несколько основных форм бактерий: кокковидные, палочковидные, извитые и ветвящиеся (рис. 2.1).
Сферические формы, или кокки - шаровидные бактерии размером 0,5-1 мкм, которые по взаимному расположению делятся на микрококки, диплококки, стрептококки, тетракокки, сарцины и стафилококки.
Микрококки (от греч. micros - малый) - отдельно расположенные клетки.
Диплококки (от греч. diploos - двойной), или парные кокки, располагаются парами (пневмококк, гонококк, менингококк), так как клетки после деления не расходятся. Пневмококк (возбудитель пневмонии) имеет с противоположных сторон ланцетовидную форму, а гонококк (возбудитель гонореи) и менингококк (возбу-
Рис. 2.1.
Формы бактерий
дитель эпидемического менингита) имеют форму кофейных зерен, обращенных вогнутой поверхностью друг к другу.
Стрептококки (от греч. streptos - цепочка) - клетки округлой или вытянутой формы, составляющие цепочку вследствие деления клеток в одной плоскости и сохранения связи между ними в месте деления.
Сарцины (от лат. sarcina - связка, тюк) располагаются в виде пакетов из 8 кокков и более, так как они образуются при делении клетки в трех взаимно перпендикулярных плоскостях.
Стафилококки (от греч. staphyle - виноградная гроздь) - кокки, расположенные в виде грозди винограда в результате деления в разных плоскостях.
Палочковидные бактерии различаются по размерам, форме концов клетки и взаимному расположению клеток. Длина клеток 1-10 мкм, толщина 0,5-2 мкм. Палочки могут быть правильной
(кишечная палочка и др.) и неправильной булавовидной (коринебактерии и др.) формы. К наиболее мелким палочковидным бактериям относятся риккетсии.
Концы палочек могут быть как бы обрезанными (сибиреязвенная бацилла), закругленными (кишечная палочка), заостренными (фузобактерии) или в виде утолщения. В последнем случае палочка похожа на булаву (коринебактерии дифтерии).
Слегка изогнутые палочки называются вибрионами (холерный вибрион). Большинство палочковидных бактерий располагается беспорядочно, так как после деления клетки расходятся. Если после деления клетки остаются связанными общими фрагментами клеточной стенки и не расходятся, то они располагаются под углом друг к другу (коринебактерии дифтерии) или образуют цепочку (сибиреязвенная бацилла).
Извитые формы - спиралевидные бактерии, которые бывают двух видов: спириллы и спирохеты. Спириллы имеют вид штопорообразно извитых клеток с крупными завитками. К патогенным спириллам относятся возбудитель содоку (болезнь укуса крыс), а также кампилобактерии и хеликобактерии, имеющие изгибы, напоминающие крылья летящей чайки. Спирохеты представляют тонкие длинные извитые бактерии, отличающиеся от спирилл более мелкими завитками и характером движения. Особенность их строения описана ниже.
Ветвящиеся - палочковидные бактерии, которые могут иметь разветвление в форме латинской буквы Y, встречающиеся у бифидобактерий, также быть представленными в виде нитевидных разветвленных клеток, способных переплетаться, образуя мицелий, что наблюдается у актиномицет.
2.2.2. Структура бактериальной клетки
Структура бактерий хорошо изучена с помощью электронной микроскопии целых клеток и их ультратонких срезов, а также других методов. Бактериальную клетку окружает оболочка, состоящая из клеточной стенки и цитоплазматической мембраны. Под оболочкой находится протоплазма, состоящая из цитоплазмы с включениями и наследственного аппарата - аналога ядра, называемого нуклеоидом (рис. 2.2). Имеются дополнительные структуры: капсула, микрокапсула, слизь, жгутики, пили. Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях способны образовывать споры.
Рис. 2.2.
Структура
бактериальной клетки: 1 - капсула; 2 - клеточная стенка; 3 -
цитоплазматическая мембрана; 4 - мезосомы; 5 - нуклеоид; 6 - плазмида; 7
- рибосомы; 8 - включения; 9 - жгутик; 10 - пили (ворсинки)
Клеточная стенка - прочная, упругая структура, придающая бактерии определенную форму и вместе с подлежащей цитоплазматической мембраной сдерживающая высокое осмотическое давление в бактериальной клетке. Она участвует в процессе деления клетки и транспорте метаболитов, имеет рецепторы для бактериофагов, бактериоцинов и различных веществ. Наиболее толстая клеточная стенка у грамположительных бактерий (рис. 2.3). Так, если толщина клеточной стенки грамотрицательных бактерий около 15-20 нм, то у грамположительных она может достигать 50 нм и более.
Основу клеточной стенки бактерий составляет пептидогликан. Пептидогликан является полимером. Он представлен параллельными полисахаридными гликановыми цепями, состоящими из повторяющихся остатков N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных гликозидной связью. Эту связь разрывает лизоцим, являющийся ацетилмурамидазой.
К N-ацетилмурамовой кислоте ковалентными связями присоединен тетрапептид. Тетрапептид состоит из L-аланина, который связан с N-ацетилмурамовой кислотой; D-глутамина, который у грамположительных бактерий соединен с L-лизином, а у грамотри-
Рис. 2.3.
Схема архитектоники клеточной стенки бактерий
цательных бактерий - с диаминопимелиновой кислотой (ДАП), которая представляет собой предшественник лизина в процессе бактериального биосинтеза аминокислот и является уникальным соединением, присутствующим только у бактерий; 4-й аминокислотой является D-аланин (рис. 2.4).
В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов и белков. Основным компонентом клеточной стенки этих бактерий является многослойный пептидогликан (муреин, мукопептид), составляющий 40-90% массы клеточной стенки. Тетрапептиды разных слоев пептидогликана у грамположительных бактерий соединены друг с другом полипептидными цепочками из 5 остатков глицина (пентаглицина), что придает пептидогликану жесткую геометрическую структуру (рис. 2.4, б). С пептидогликаном ктеточной стенки грамположительных бактерий ковалентно связаны тейхоевые кислоты (от греч. tekhos - стенка), молекулы которых представляют собой цепи из 8-50 остатков глицерола и рибитола, соединенных фосфатными мостиками. Форму и прочность бактериям придает жесткая волокнистая структура многослойного, с поперечными пептидными сшивками пептидогликана.
Рис. 2.4.
Структура пептидогликана: а - грамотрицательные бактерии; б - грамположительные бактерии
Способность грамположительных бактерий при окраске по Граму удерживать генциановый фиолетовый в комплексе с йодом (сине-фиолетовая окраска бактерий) связана со свойством многослойного пептидогликана взаимодействовать с красителем. Кроме этого последующая обработка мазка бактерий спиртом вызывает сужение пор в пептидогликане и тем самым задерживает краситель в клеточной стенке.
Грамотрицательные бактерии после воздействия спиртом утрачивают краситель, что обусловлено меньшим количеством пептидогликана (5-10% массы клеточной стенки); они обесцвечиваются спиртом, и при обработке фуксином или сафранином приобретают красный цвет. Это связано с особенностями строения клеточной стенки. Пептидогликан в клеточной стенке грамотрицательных бактерий представлен 1-2 слоями. Тетрапептиды слоев соединены между собой прямой пептидной связью между аминогруппой ДАП одного тетрапептида и карбоксильной группой D-аланина тетрапептида другого слоя (рис. 2.4, а). Кнаружи от пептидогликана расположен слой липопротеина, соединенный с пептидогликаном через ДАП. За ним следует наружная мембрана клеточной стенки.
Наружная мембрана является мозаичной структурой, представленной липополисахаридами (ЛПС), фосфолипидами и белками. Внутренний слой ее представлен фосфолипидами, а в наружном слое расположен ЛПС (рис. 2.5). Таким образом, наружная мем-
Рис. 2.5.
Структура липополисахарида
брана асимметрична. ЛПС наружной мембраны состоит из трех фрагментов:
Липида А - консервативной структуры, практически одинаковой у грамотрицательных бактерий. Липид А состоит из фосфорилированных глюкозоаминовых дисахаридных единиц, к которым прикреплены длинные цепочки жирных кислот (см. рис. 2.5);
Ядра, или стержневой, коровой части (от лат. core - ядро), относительно консервативной олигосахаридной структуры;
Высоковариабельной О-специфической цепи полисахарида, образованной повторяющимися идентичными олигосахаридными последовательностями.
ЛПС заякорен в наружной мембране липидом А, обусловливающим токсичность ЛПС и отождествляемым поэтому с эндотоксином. Разрушение бактерий антибиотиками приводит к освобождению большого количества эндотоксина, что может вызвать у больного эндотоксический шок. От липида А отходит ядро, или стержневая часть ЛПС. Наиболее постоянной частью ядра ЛПС является кетодезоксиоктоновая кислота. О-специфическая полисахаридная цепь, отходящая от стержневой части молекулы ЛПС,
состоящая из повторяющихся олигосахаридных единиц, обусловливает серогруппу, серовар (разновидность бактерий, выявляемая с помощью иммунной сыворотки) определенного штамма бактерий. Таким образом, с понятием ЛПС связаны представления об О-антигене, по которому можно дифференцировать бактерии. Генетические изменения могут привести к дефектам, укорочению ЛПС бактерий и появлению в результате этого шероховатых колоний R-форм, теряющих О-антигенную специфичность.
Не все грамотрицательные бактерии имеют полноценную О-специфическую полисахаридную цепь, состоящую из повторяющихся олигосахаридных единиц. В частности, бактерии рода Neisseria имеют короткий гликолипид, который называется липоолигосахаридом (ЛОС). Он сравним с R-формой, потерявшей О-антигенную специфичность, наблюдаемой у мутантных шероховатых штаммов E. coli. Структура ЛОС напоминает структуру гликосфинголипида цитоплазматической мембраны человека, поэтому ЛОС мимикрирует микроб, позволяя ему избегать иммунного ответа хозяина.
Белки матрикса наружной мембраны пронизывают ее таким образом, что молекулы белка, называемые поринами, окаймляют гидрофильные поры, через которые проходят вода и мелкие гидрофильные молекулы с относительной массой до 700 Д.
Между наружной и цитоплазматической мембраной находится периплазматическое пространство, или периплазма, содержащая ферменты (протеазы, липазы, фосфатазы, нуклеазы, β-лактамазы), а также компоненты транспортных систем.
При нарушении синтеза клеточной стенки бактерий под влиянием лизоцима, пенициллина, защитных факторов организма и других соединений образуются клетки с измененной (часто шаровидной) формой: протопласты - бактерии, полностью лишенные клеточной стенки; сферопласты - бактерии с частично сохранившейся клеточной стенкой. После удаления ингибитора клеточной стенки такие измененные бактерии могут реверсировать, т.е. приобретать полноценную клеточную стенку и восстанавливать исходную форму.
Бактерии сфероили протопластного типа, утратившие способность к синтезу пептидогликана под влиянием антибиотиков или других факторов и способные размножаться, называются L-формами (от названия Института им. Д. Листера, где они впер-
вые были изучены). L-формы могут возникать и в результате мутаций. Они представляют собой осмотически чувствительные, шаровидные, колбовидные клетки различной величины, в том числе и проходящие через бактериальные фильтры. Некоторые L-формы (нестабильные) при удалении фактора, приведшего к изменениям бактерий, могут реверсировать, возвращаясь в исходную бактериальную клетку. L-формы могут образовывать многие возбудители инфекционных болезней.
Цитоплазматическая мембрана при электронной микроскопии ультратонких срезов представляет собой трехслойную мембрану (2 темных слоя толщиной по 2,5 нм каждый разделены светлым - промежуточным). По структуре она похожа на плазмолемму клеток животных и состоит из двойного слоя липидов, главным образом фосфолипидов, с внедренными поверхностными, а также интегральными белками, как бы пронизывающими насквозь структуру мембраны. Некоторые из них являются пермеазами, участвующими в транспорте веществ. В отличие от эукариотических клеток, в цитоплазматической мембране бактериальной клетки отсутствуют стеролы (за исключением микоплазм).
Цитоплазматическая мембрана является динамической структурой с подвижными компонентами, поэтому ее представляют как мобильную текучую структуру. Она окружает наружную часть цитоплазмы бактерий и участвует в регуляции осмотического давления, транспорте веществ и энергетическом метаболизме клетки (за счет ферментов цепи переноса электронов, аденозинтрифосфатазы - АТФазы и др.). При избыточном росте (по сравнению с ростом клеточной стенки) цитоплазматическая мембрана образует инвагинаты - впячивания в виде сложно закрученных мембранных структур, называемые мезосомами. Менее сложно закрученные структуры называются внутрицитоплазматическими мембранами. Роль мезосом и внутрицитоплазматических мембран до конца не выяснена. Предполагают даже, что они являются артефактом, возникающим после приготовления (фиксации) препарата для электронной микроскопии. Тем не менее считают, что производные цитоплазматической мембраны участвуют в делении клетки, обеспечивая энергией синтез клеточной стенки, принимают участие в секреции веществ, спорообразовании, т.е. в процессах с высокой затратой энергии. Цитоплазма занимает основной объем бактери-
альной клетки и состоит из растворимых белков, рибонуклеиновых кислот, включений и многочисленных мелких гранул - рибосом, ответственных за синтез (трансляцию) белков.
Рибосомы бактерий имеют размер около 20 нм и коэффициент седиментации 70S, в отличие от 80S-рибосом, характерных для эукариотических клеток. Поэтому некоторые антибиотики, связываясь с рибосомами бактерий, подавляют синтез бактериального белка, не влияя на синтез белка эукариотических клеток. Рибосомы бактерий могут диссоциировать на две субъединицы: 50S и 30S. рРНК - консервативные элементы бактерий («молекулярные часы» эволюции). 16S-рРНК входит в состав малой субъединицы рибосом, а 23S-рРНК - в состав большой субъединицы рибосом. Изучение 16S рРНК является основой геносистематики, позволяя оценить степень родства организмов.
В цитоплазме имеются различные включения в виде гранул гликогена, полисахаридов, β-оксимасляной кислоты и полифосфатов (волютин). Они накапливаются при избытке питательных веществ в окружающей среде и выполняют роль запасных веществ для питания и энергетических потребностей.
Волютин обладает сродством к основным красителям и легко выявляется с помощью специальных методов окраски (например, по Нейссеру) в виде метахроматических гранул. Толуидиновым синим или метиленовым голубым волютин окрашивается в краснофиолетовый цвет, а цитоплазма бактерии - в синий. Характерное расположение гранул волютина выявляется у дифтерийной палочки в виде интенсивно прокрашивающихся полюсов клетки. Метахроматическое окрашивание волютина связано с высоким содержанием полимеризованного неорганического полифосфата. При электронной микроскопии они имеют вид электронноплотных гранул размером 0,1-1 мкм.
Нуклеоид - эквивалент ядра у бактерий. Он расположен в центральной зоне бактерий в виде двунитевой ДНК, плотно уложенной наподобие клубка. Нуклеоид бактерий, в отличие от эукариот, не имеет ядерной оболочки, ядрышка и основных белков (гистонов). У большинства бактерий содержится одна хромосома, представленная замкнутой в кольцо молекулой ДНК. Но у некоторых бактерий имеются две хромосомы кольцевой формы (V. cholerae) и линейные хромосомы (см. раздел 5.1.1). Нуклеоид выявляется в световом микроскопе после окраски специфическими для ДНК
методами: по Фельгену или по Романовскому-Гимзе. На электронограммах ультратонких срезов бактерий нуклеоид имеет вид светлых зон с фибриллярными, нитевидными структурами ДНК, связанной определенными участками с цитоплазматической мембраной или мезосомой, участвующими в репликации хромосомы.
Кроме нуклеоида, в бактериальной клетке имеются внехромосомные факторы наследственности - плазмиды (см. раздел 5.1.2), представляющие собой ковалентно замкнутые кольца ДНК.
Капсула, микрокапсула, слизь. Капсула - слизистая структура толщиной более 0,2 мкм, прочно связанная с клеточной стенкой бактерий и имеющая четко очерченные внешние границы. Капсула различима в мазках-отпечатках из патологического материала. В чистых культурах бактерий капсула образуется реже. Она выявляется при специальных методах окраски мазка по Бурри- Гинсу, создающих негативное контрастирование веществ капсулы: тушь создает темный фон вокруг капсулы. Капсула состоит из полисахаридов (экзополисахаридов), иногда из полипептидов, например у сибиреязвенной бациллы она состоит из полимеров D-глутаминовой кислоты. Капсула гидрофильна, включает большое количество воды. Она препятствует фагоцитозу бактерий. Капсула антигенна: антитела к капсуле вызывают ее увеличение (реакция набухания капсулы).
Многие бактерии образуют микрокапсулу - слизистое образование толщиной менее 0,2 мкм, выявляемое лишь при электронной микроскопии.
От капсулы следует отличать слизь - мукоидные экзополисахариды, не имеющие четких внешних границ. Слизь растворима в воде.
Мукоидные экзополисахариды характерны для мукоидных штаммов синегнойной палочки, часто встречающихся в мокроте больных кистозным фиброзом. Бактериальные экзополисахариды участвуют в адгезии (прилипании к субстратам); их еще называют гликокаликсом.
Капсула и слизь предохраняют бактерии от повреждений, высыхания, так как, являясь гидрофильными, хорошо связывают воду, препятствуют действию защитных факторов макроорганизма и бактериофагов.
Жгутики бактерий определяют подвижность бактериальной клетки. Жгутики представляют собой тонкие нити, берущие на-
чало от цитоплазматической мембраны, имеют большую длину, чем сама клетка. Толщина жгутиков 12-20 нм, длина 3-15 мкм. Они состоят из трех частей: спиралевидной нити, крюка и базального тельца, содержащего стержень со специальными дисками (одна пара дисков у грамположительных и две пары у грамотрицательных бактерий). Дисками жгутики прикреплены к цитоплазматической мембране и клеточной стенке. При этом создается эффект электромотора со стержнем - ротором, вращающим жгутик. В качестве источника энергии используется разность протонных потенциалов на цитоплазматической мембране. Механизм вращения обеспечивает протонная АТФ-синтетаза. Скорость вращения жгутика может достигать 100 об/с. При наличии у бактерии нескольких жгутиков они начинают синхронно вращаться, сплетаясь в единый пучок, образующий своеобразный пропеллер.
Жгутики состоят из белка - флагеллина (flagellum - жгутик), являющегося антигеном - так называемый Н-антиген. Субъединицы флагеллина закручены в виде спирали.
Число жгутиков у бактерий разных видов варьирует от одного (монотрих) у холерного вибриона до десятка и сотен, отходящих по периметру бактерии (перитрих), у кишечной палочки, протея и др. Лофотрихи имеют пучок жгутиков на одном из концов клетки. Амфитрихи имеют по одному жгутику или пучку жгутиков на противоположных концах клетки.
Жгутики выявляют с помощью электронной микроскопии препаратов, напыленных тяжелыми металлами, или в световом микроскопе после обработки специальными методами, основанными на протравливании и адсорбции различных веществ, приводящих к увеличению толщины жгутиков (например, после серебрения).
Ворсинки, или пили (фимбрии) - нитевидные образования, более тонкие и короткие (3-10 нм * 0,3-10 мкм), чем жгутики. Пили отходят от поверхности клетки и состоят из белка пилина. Известно несколько типов пилей. Пили общего типа отвечают за прикрепления к субстрату, питание и водно-солевой обмен. Они многочисленны - несколько сотен на клетку. Половые пили (1-3 на клетку) создают контакт между клетками, осуществляя между ними передачу генетической информации путем конъюгации (см. главу 5). Особый интерес представляют пили IV типа, у которых концы обладают гидрофобностью, в результате чего они закручиваются, эти пили называют еще кудряшками. Располага-
ются они по полюсам клетки. Эти пили встречаются у патогенных бактерий. Они обладают антигенными свойствами, осуществляют контакт бактерии с клеткой-хозяином, участвуют в образовании биопленки (см. главу 3). Многие пили являются рецепторами для бактериофагов.
Споры - своеобразная форма покоящихся бактерий с грамположительным типом строения клеточной стенки. Спорообразующие бактерии рода Bacillus, у которых размер споры не превышает диаметр клетки, называются бациллами. Спорообразующие бактерии, у которых размер споры превышает диаметр клетки, отчего они принимают форму веретена, называются клостридиями, например бактерии рода Clostridium (от лат. Clostridium - веретено). Споры кислотоустойчивы, поэтому окрашиваются по методу Ауески или по методу Циля-Нельсена в красный, а вегетативная клетка - в синий цвет.
Спорообразование, форма и расположение спор в клетке (вегетативной) являются видовым свойством бактерий, что позволяет отличать их друг от друга. Форма спор бывает овальной и шаровидной, расположение в клетке - терминальное, т.е. на конце палочки (у возбудителя столбняка), субтерминальное - ближе к концу палочки (у возбудителей ботулизма, газовой гангрены) и центральное (у сибиреязвенной бациллы).
Процесс спорообразования (споруляция) проходит ряд стадий, в течение которых часть цитоплазмы и хромосома бактериальной вегетативной клетки отделяются, окружаясь врастающей цитоплазматической мембраной, - образуется проспора.
В протопласте проспоры находятся нуклеоид, белоксинтезирующая система и система получения энергии, основанная на гликолизе. Цитохромы отсутствуют даже у аэробов. Не содержится АТФ, энергия для прорастания сохраняется в форме 3-глицеринфосфата.
Проспору окружают две цитоплазматические мембраны. Слой, окружающий внутреннюю мембрану споры, называется стенкой споры, он состоит из пептидогликана и является главным источником клеточной стенки при прорастании споры.
Между наружной мембраной и стенкой споры формируется толстый слой, состоящий из пептидогликана, имеющего много сшивок, - кортекс.
Кнаружи от внешней цитоплазматической мембраны расположена оболочка споры, состоящая из кератиноподобных белков, со-
держащих множественные внутримолекулярные дисульфидные связи. Эта оболочка обеспечивает резистентность к химическим агентам. Споры некоторых бактерий имеют дополнительный покров - экзоспориум липопротеиновой природы. Таким образом формируется многослойная плохо проницаемая оболочка.
Спорообразование сопровождается интенсивным потреблением проспорой, а затем и формирующейся оболочкой споры дипиколиновой кислоты и ионов кальция. Спора приобретает термоустойчивость, которую связывают с наличием в ней дипиколината кальция.
Спора долго может сохраняться из-за наличия многослойной оболочки, дипиколината кальция, низкого содержания воды и вялых процессов метаболизма. В почве, например, возбудители сибирской язвы и столбняка могут сохраняться десятки лет.
В благоприятных условиях споры прорастают, проходя три последовательные стадии: активации, инициации, вырастания. При этом из одной споры образуется одна бактерия. Активация - это готовность к прорастанию. При температуре 60-80 °С спора активируется для прорастания. Инициация прорастания длится несколько минут. Стадия вырастания характеризуется быстрым ростом, сопровождающимся разрушением оболочки и выходом проростка.
2.2.3. Особенности строения спирохет, риккетсий, хламидий, актиномицет и микоплазм
Спирохеты - тонкие длинные извитые бактерии. Они состоят из наружной мембранной клеточной стенки, которая окружает цитоплазматический цилиндр. Поверх наружной мембраны располагается прозрачный чехол гликозаминогликановой природы. Под наружной мембранной клеточной стенки располагаются фибриллы, закручивающиеся вокруг цитоплазматического цилиндра, придавая бактериям винтообразную форму. Фибриллы прикреплены к концам клетки и направлены навстречу друг другу. Число и расположение фибрилл варьируют у разных видов. Фибриллы участвуют в передвижении спирохет, придавая клеткам вращательное, сгибательное и поступательное движение. При этом спирохеты образуют петли, завитки, изгибы, которые названы вторичными завитками. Спирохеты плохо воспринимают красители. Обычно их окрашивают по Романовскому-Гимзе или серебрением. В живом
виде спирохеты исследуют с помощью фазово-контрастной или темнопольной микроскопии.
Спирохеты представлены тремя родами, патогенными для человека: Treponema, Borrelia, Leptospira.
Трепонемы (род Treponema) имеют вид тонких штопорообразно закрученных нитей с 8-12 равномерными мелкими завитками. Вокруг протопласта трепонем расположены 3-4 фибриллы (жгутики). В цитоплазме имеются цитоплазматические филаменты. Патогенными представителями являются Т. pallidum - возбудитель сифилиса, T. pertenue - возбудитель тропической болезни - фрамбезии. Имеются и сапрофиты - обитатели полости рта человека, ила водоемов.
Боррелии (род Borrelia), в отличие от трепонем, более длинные, имеют по 3-8 крупных завитков и 7-20 фибрилл. К ним относятся возбудитель возвратного тифа (В. recurrentis) и возбудители болезни Лайма (В. burgdorferi) и других заболеваний.
Лептоспиры (род Leptospira) имеют завитки неглубокие и частые в виде закрученной веревки. Концы этих спирохет изогнуты наподобие крючков с утолщениями на концах. Образуя вторичные завитки, они приобретают вид букв S или С; имеют две осевые фибриллы. Патогенный представитель L. interrogans вызывает лептоспироз при попадании в организм с водой или пищей, приводя к кровоизлияниям и желтухе.
Риккетсии обладают независимым от клетки хозяина метаболизмом, однако, возможно, они получают от клетки хозяина макроэргические соединения для своего размножения. В мазках и тканях их окрашивают по Романовскому-Гимзе, по Маккиавелло- Здродовскому (риккетсии красного цвета, а инфицированные клетки - синего).
У человека риккетсии вызывают эпидемический сыпной тиф (R. prowazekii), клещевой риккетсиоз (R. sibirica), пятнистую лихорадку Скалистых гор (R. rickettsii) и другие риккетсиозы.
Строение их клеточной стенки напоминает таковую грамотрицательных бактерий, хотя имеются отличия. Она не содержит типичного пептидогликана: в его составе полностью отсутствует N-ацетилмурамовая кислота. В состав клеточной стенки входит двойная наружная мембрана, которая включает липополисахарид и белки. Несмотря на отсутствие пептидогликана, клеточная стенка хламидий обладает ригидностью. Цитоплазма клетки ограничена внутренней цитоплазматической мембраной.
Основным методом выявления хламидий является окраска по Романовскому-Гимзе. Цвет окраски зависит от стадии жизненного цикла: элементарные тельца окашиваются в пурпурный цвет на фоне голубой цитоплазмы клетки, ретикулярные тельца - в голубой цвет.
У человека хламидии вызывают поражения глаз (трахома, конъюнктивит), урогенитального тракта, легких и др.
Актиномицеты - ветвящиеся, нитевидные или палочковидные грамположительные бактерии. Свое название (от греч. actis - луч, mykes - гриб) они получили в связи с образованием в пораженных тканях друз - гранул из плотно переплетенных нитей в виде
лучей, отходящих от центра и заканчивающихся колбовидными утолщениями. Актиномицеты, как и грибы, образуют мицелий - нитевидные переплетающиеся клетки (гифы). Они формируют субстратный мицелий, образующийся в результате врастания клеток в питательную среду, и воздушный, растущий на поверхности среды. Актиномицеты могут делиться путем фрагментации мицелия на клетки, похожие на палочковидные и кокковидные бактерии. На воздушных гифах актиномицетов образуются споры, служащие для размножения. Споры актиномицетов обычно не термостойки.
Общую филогенетическую ветвь с актиномицетами образуют так называемые нокардиоподобные (нокардиоформные) актиномицеты - собирательная группа палочковидных бактерий неправильной формы. Их отдельные представители образуют ветвящиеся формы. К ним относят бактерии родов Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia и др. Нокардиоподобные актиномицеты отличаются наличием в клеточной стенке сахаров арабинозы, галактозы, а также миколовых кислот и больших количеств жирных кислот. Миколовые кислоты и липиды клеточных стенок обусловливают кислотоустойчивость бактерий, в частности микобактерий туберкулеза и лепры (при окраске по Цилю-Нельсену они имеют красный цвет, а некислотоустойчивые бактерии и элементы ткани, мокроты - синий цвет).
Патогенные актиномицеты вызывают актиномикоз, нокардии - нокардиоз, микобактерии - туберкулез и лепру, коринебактерии - дифтерию. Сапрофитные формы актиномицетов и нокардиоподобных актиномицетов широко распространены в почве, многие из них являются продуцентами антибиотиков.
Микоплазмы - мелкие бактерии (0,15-1 мкм), окруженные только цитоплазматической мембраной, содержащей стеролы. Они относятся к классу Mollicutes. Из-за отсутствия клеточной стенки микоплазмы осмотически чувствительны. Имеют разнообразную форму: кокковидную, нитевидную, колбовидную. Эти формы видны при фазово-контрастной микроскопии чистых культур микоплазм. На плотной питательной среде микоплазмы образуют колонии, напоминающие яичницу-глазунью: центральная непрозрачная часть, погруженная в среду, и просвечивающая периферия в виде круга.
Микоплазмы вызывают у человека атипичную пневмонию (Mycoplasma pneumoniae) и поражения мочеполового тракта
(М. hominis и др.). Микоплазмы вызывают заболевания не только у животных, но и у растений. Достаточно широко распространены и непатогенные представители.
2.3. Строение и классификация грибов
Грибы относятся к домену Eukarya, царству Fungi (Mycota, Mycetes). Недавно грибы и простейшие были разделены на самостоятельные царства: царство Eumycota (настоящие грибы), царство Chromista и царство Protozoa. Некоторые микроорганизмы, ранее считавшиеся грибами или простейшими, были перемещены в новое царство Chromista (хромовики). Грибы - многоклеточные или одноклеточные нефотосинтезирующие (бесхлорофильные) эукариотические микроорганизмы с толстой клеточной стенкой. Они имеют ядро с ядерной оболочкой, цитоплазму с органеллами, цитоплазматическую мембрану и многослойную ригидную клеточную стенку, состоящую из нескольких типов полисахаридов (маннаны, глюканы, целлюлоза, хитин), а также белка, липидов и др. Некоторые грибы образуют капсулу. Цитоплазматическая мембрана содержит гликопротеины, фосфолипиды и эргостеролы (в отличие от холестерина - главного стерола тканей млекопитающих). Большинство грибов - облигатные или факультативные аэробы.
Грибы широко распространены в природе, особенно в почве. Некоторые грибы содействуют производству хлеба, сыра, молочнокислых продуктов и алкоголя. Другие грибы продуцируют антимикробные антибиотики (например, пенициллин) и иммунодепрессивные лекарства (например, циклоспорин). Грибы используют генетики и молекулярные биологи для моделирования различных процессов. Фитопатогенные грибы наносят значительный ущерб сельскому хозяйству, вызывая грибковые болезни злаковых растений и зерна. Инфекции, вызываемые грибами, называются микозами. Различают гифальные и дрожжевые грибы.
Гифальные (плесневые) грибы, или гифомицеты, состоят из тонких нитей толщиной 2-50 мкм, называемых гифами, которые сплетаются в грибницу или мицелий (плесень). Тело гриба называется талломом. Различают демациевые (пигментированные - коричневые или черные) и гиалиновые (непигментированные) гифомицеты. Гифы, врастающие в питательный субстрат, отвечают за питание гриба и называются вегетативными гифами. Гифы, ра-
стущие над поверхностью субстрата, называются воздушными или репродуктивными гифами (отвечают за размножение). Колонии из-за воздушного мицелия имеют пушистый вид.
Различают низшие и высшие грибы: гифы высших грибов разделены перегородками, или септами с отверстиями. Гифы низших грибов не имеют перегородок, представляя собой многоядерные клетки, называемые ценоцитными (от греч. koenos - единый, общий).
Дрожжевые грибы (дрожжи) в основном представлены отдельными овальными клетками диаметром 3-15 мкм, а их колонии, в отличие от гифальных грибов, имеют компактный вид. По типу полового размножения они распределены среди высших грибов - аскомицет и базидиомицет. При бесполом размножении дрожжи образуют почки или делятся. Могут образовывать псевдогифы и ложный мицелий (псевдомицелий) в виде цепочек удлиненных клеток - «сарделек». Грибы, аналогичные дрожжам, но не имеющие полового способа размножения, называют дрожжеподобными. Они размножаются только бесполым способом - почкованием или делением. Понятия «дрожжеподобные грибы» часто идентифицируют с понятием «дрожжи».
Многие грибы обладают диморфизмом - способностью к гифальному (мицелиальному) или дрожжеподобному росту в зависимости от условий культивирования. В инфицированном организме они растут в виде дрожжеподобных клеток (дрожжевая фаза), а на питательных средах образуют гифы и мицелий. Диморфизм связан с температурным фактором: при комнатной температуре образуется мицелий, а при 37 °С (при температуре тела человека) - дрожжеподобные клетки.
Грибы размножаются половым или бесполым способом. Половое размножение грибов происходит с образованием гамет, половых спор и других половых форм. Половые формы называются телеоморфами.
Бесполое размножение грибов происходит с образованием соответствующих форм, называемых анаморфами. Такое размножение происходит почкованием, фрагментацией гиф и бесполыми спорами. Эндогенные споры (спорангиоспоры) созревают внутри округлой структуры - спорангия. Экзогенные споры (конидии) формируются на кончиках плодоносящих гиф, так называемых конидиеносцах.
Различают разнообразые конидии. Артроконидии (артроспоры), или таллоконидии, образуются при равномерном септировании и расчленении гиф, а бластоконидии образуются в результате почкования. Небольшие одноклеточные конидии называются микроконидиями, большие многоклеточные конидии - макроконидиями. К бесполым формам грибов относят также хламидоконидии, или хламидоспоры (толстостенные крупные покоящиеся клетки или комплекс мелких клеток).
Различают совершенные и несовершенные грибы. Совершенные грибы имеют половой способ размножения; к ним относят зигомицеты (Zygomycota), аскомицеты (Ascomycota) и базидиомицеты (Basidiomycota). Несовершенные грибы имеют только бесполый способ размножения; к ним относят формальный условный тип/ группу грибов - дейтеромицеты (Deiteromycota).
Зигомицеты относятся к низшим грибам (мицелий несептированный). Они включают представителей родов Mucor, Rhizopus, Rhizomucor, Absidia, Basidiobolus, Conidiobolus. Распространены в почве и воздухе. Могут вызывать зигомикоз (мукоромикоз) легких, головного мозга и других органов человека.
При бесполом размножении зигомицет на плодоносящей гифе (спорангиеносце) образуется спорангий - шаровидное утолщение с оболочкой, содержащее многочисленные спорангиоспоры (рис. 2.6, 2.7). Половое размножение у зигомицетов происходит с помощью зигоспор.
Аскомицеты (сумчатые грибы) имеют септированный мицелий (кроме одноклеточных дрожжей). Свое название они получили от основного органа плодоношения - сумки, или аска, содержащего 4 или 8 гаплоидных половых спор (аскоспор).
К аскомицетам относятся отдельные представители (телеоморфы) родов Aspergillus и Penicillium. Большинство грибов родов Aspergillus, Penicillium являются анаморфами, т.е. размножаются только беспо-
Рис. 2.6.
Грибы рода Mucor
(рис. А.С. Быкова)
Рис. 2.7.
Грибы рода Rhizopus.
Развитие спорангия, спорангиоспор и ризоидов
лым путем с помощью бесполых спор - конидий (рис. 2.8, 2.9) и должны быть отнесены по этому признаку к несовершенным грибам. У грибов рода Aspergillus на концах плодоносящих гиф, конидиеносцах, имеются утолщения - стеригмы, фиалиды, на которых образуются цепочки конидий («леечная плесень»).
У грибов рода Penicillium (кистевик) плодоносящая гифа напоминает кисточку, так как из нее (на конидиеносце) образуются утолщения, разветвляющиеся на более мелкие структуры - стеригмы, фиалиды, на которых находятся цепочки конидий. Некоторые виды аспергилл могут вызывать аспергиллезы и афлатоксикозы, пенициллы могут вызывать пенициллиозы.
Представителями аскомицетов являются телеоморфы родов Trichophyton, Microsporum, Histoplasma, Blastomyces, а также дрож-
Рис. 2.8.
Грибы рода Penicillium.
Цепочки конидий отходят от фиалид
Рис. 2.9.
Грибы рода Aspergillus fumigatus.
От фиалид отходят цепочки конидий
Базидиомицеты включают шляпочные грибы. Они имеют септированный мицелий и образуют половые споры - базидиоспоры путем отшнуровывания от базидия - концевой клетки мицелия, гомологичной аску. К базидиомицетам относятся некоторые дрожжи, например телеоморфы Cryptococcus neoformans.
Дейтеромицеты являются несовершенными грибами (Fungi imperfecti, анаморфные грибы, конидиальные грибы). Это условный, формальный таксон грибов, объединяющий грибы, не имеющие полового размножения. Недавно вместо термина «дейтеромицеты» предложен термин «митоспоровые грибы» - грибы, размножающиеся неполовыми спорами, т.е. путем митоза. При установлении факта полового размножения несовершенных грибов их переносят в один из известных типов - Ascomycota или Basidiomycota, присваивая название телеоморфной формы. Дейтеромицеты имеют септированный мицелий, размножаются только путем бесполого формирования конидий. К дейтеромицетам относятся несовершенные дрожжи (дрожжеподобные грибы), например некоторые грибы рода Candida, поражающие кожу, слизистые оболочки и внутренние органы (кандидоз). Они имеют овальную форму, диаметр 2-5 мкм, делятся почкованием, образуют псевдогифы (псевдомицелий) в виде цепочек из удлиненных клеток, иногда образуют гифы. Для Candida albicans характерно образование хламидоспор (рис. 2.10). К дейтеромицетам относят также другие грибы, не имеющие полового способа размножения, относящиеся к родам Epidermophyton, Coccidioides, Paracoccidioides, Sporothrix, Aspergillus, Phialophora, Fonsecaeа, Exophiala, Cladophialophora, Bipolaris, Exerohilum, Wangiella, Alrernaria и др.
Рис. 2.10.
Грибы рода Candida albicans
(рис. А.С. Быкова)
2.4. Строение и классификация простейших
Простейшие относятся к домену Eukarya, царству животных (Animalia), подцарству Protozoa. Недавно предложено выделить простейшие в ранг царства Protozoa.
Клетка простейших окружена мембраной (пелликулой) - аналогом цитоплазматической мембраны клеток животных. Она имеет ядро с ядерной оболочкой и ядрышком, цитоплазму, содержащую эндоплазматический ретикулум, митохондрии, лизосомы и рибосомы. Размеры простейших колеблются от 2 до 100 мкм. При окраске по Романовскому-Гимзе ядро простейших имеет красный, а цитоплазма - голубой цвет. Простейшие передвигаются с помощью жгутиков, ресничек или псевдоподий, некоторые из них имеют пищеварительные и сократительные (выделительные) вакуоли. Они могут питаться в результате фагоцитоза или образования особых структур. По типу питания они разделяются на гетеротрофы и аутотрофы. Многие простейшие (дизентерийная амеба, лямблии, трихомонады, лейшмании, балантидии) могут расти на питательных средах, содержащих нативные белки и аминокислоты. Для их культивирования используют также культуры клеток, куриные эмбрионы и лабораторных животных.
Простейшие размножаются бесполым путем - двойным или множественным (шизогония) делением, а некоторые и половым путем (спорогония). Одни простейшие размножаются внеклеточно (лямблии), а другие - внутриклеточно (плазмодии, токсоплазма, лейшмании). Жизненный цикл простейших характеризуется стадийностью - образованием стадии трофозоита и стадии цисты. Цисты - покоящиеся стадии, устойчивые к изменению температуры и влажности. Кислотоустойчивостью отличаются цисты Sarcocystis, Cryptosporidium и Isospora.
Ранее простейшие, вызывающие заболевания у человека, были представлены 4 типами 1 (Sarcomastigophora, Apicomplexa, Ciliophora, Microspora). Эти типы недавно реклассифицированы на большее количество, появились новые царства - Protozoa и Chromista (табл. 2.2). В новое царство Chromista (хромовики) вошли некоторые простейшие и грибы (бластоцисты, оомицеты и Rhinosporidium seeberi). Царство Protozoa включает амебы, жгутиконосцы, споровики и реснитчатые. Они подразделены на различные типы, среди которых различают амебы, жгутиконосцы, споровики и реснитчатые.
Таблица 2.2. Представители царств Protozoa и Chromista, имеющие медицинское значение
1 Тип Sarcomastigophora
состоял из подтипов Sarcodina
и Mastigophora.
Подтип Sarcodina
(саркодовые) включал дизентерийную амебу, а подтип Mastigophora
(жгутиконосцы) - трипаносомы, лейшмании, лямблию и трихомонады. Тип Apicomplexa
включал класс Sporozoa
(споровики), куда входили плазмодии малярии, токсоплазма, криптоспоридии и др. Тип Ciliophora
включает балантидии, а тип Microspora
- микроспоридии.
Окончание табл. 2.2
К амебам относятся возбудитель амебиаза человека - амебной дизентерии (Entamoeba histolytica),
свободно
живущие и непатогенные амебы (кишечная амеба и др.). Амебы размножаются
бинарно бесполым путем. Их жизненный цикл состоит из стадии трофозоита
(растущая, подвижная клетка, малоустойчивая) и стадии цисты. Трофозоиты
передвигаются с помощью псевдоподий, которые захватывают и погружают в
цитоплазму питательные вещества. Из
трофозоита образуется циста, устойчивая к внешним факторам. Попав в кишечник, она превращается в трофозоит.
Жгутиконосцы характеризуются наличием жгутиков: у лейшманий один жгутик, у трихомонад 4 свободных жгутика и один жгутик, соединенный с короткой ундулирующей мембраной. Ими являются:
Жгутиконосцы крови и тканей (лейшмании - возбудители лейшманиозов; трипаносомы - возбудители сонной болезни и болезни Шагаса);
Жгутиконосцы кишечника (лямблия - возбудитель лямблиоза);
Жгутиконосцы мочеполового тракта (трихомонада влагалищная - возбудитель трихомоноза).
Реснитчатые представлены балантидиями, которые поражают толстую кишку человека (балантидиазная дизентерия). Балантидии имеют стадию трофозоита и цисты. Трофозоит подвижен, имеет многочисленные реснички, более тонкие и короткие, чем жгутики.
2.5. Строение и классификация вирусов
Вирусы - мельчайшие микробы, относящиеся к царству Virae (от лат. virus - яд). Они не имеют клеточного строения и состоят
Структуру вирусов из-за их малых размеров изучают с помощью электронной микроскопии как вирионов, так и их ультратонких срезов. Размеры вирусов (вирионов) определяют напрямую с помощью электронной микроскопии или косвенно методом ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, методом ультрацентрифугирования. Размер вирусов колеблется от 15 до 400 нм (1 нм равен 1/1000 мкм): к маленьким вирусам, размер которых сходен с размером рибосом, относят парвовирусы и вирус полиомиелита, а к наиболее крупным - вирус натуральной оспы (350 нм). Вирусы отличаются по форме вирионов, которые имеют вид палочек (вирус табачной мозаики), пули (вирус бешенства), сферы (вирусы полиомиелита, ВИЧ), нити (филовирусы), сперматозоида (многие бактериофаги).
Вирусы поражают воображение своим разнообразием структуры и свойств. В отличие от клеточных геномов, которые содержат однородную двунитевую ДНК, вирусные геномы чрезвычайно разнообразны. Различают ДНК- и РНК-содержащие вирусы, которые гаплоидны, т.е. имеют один набор генов. Диплоидный геном имеют только ретровирусы. Геном вирусов содержит от 6 до 200 генов и представлен различными видами нуклеиновых кислот: двунитевыми, однонитевыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными.
Среди однонитевых РНК-содержащих вирусов различают геномные плюс-нить РНК и минус-нить РНК (полярность РНК). Плюс-нить (позитивная нить) РНК этих вирусов, кроме геномной (наследственной) функции, выполняет функцию информационной, или матричной РНК (иРНК, или мРНК); она является матрицей для белкового синтеза на рибосомах инфицированной клетки. Плюс-нить РНК является инфекционной: при введении в чувствительные клетки она способна вызвать инфекционный про-
цесс. Минус-нить (негативная нить) РНК-содержащих вирусов выполняет только наследственную функцию; для синтеза белка на минус-нити РНК синтезируется комплементарная ей нить. У некоторых вирусов РНК-геном является амбиполярным (ambisense от греч. амби - с обеих сторон, двойная комплементарность), т.е. содержит плюс- и минус-сегменты РНК.
Различают простые вирусы (например, вирус гепатита А) и сложные вирусы (например, вирусы гриппа, герпеса, коронавирусы).
Простые, или безоболочечные, вирусы имеют только нуклеиновую кислоту, связанную с белковой структурой, называемой капсидом (от лат. capsa - футляр). Протеины, связанные с нуклеиновой кислотой, известны как нуклеопротеины, а ассоциация вирусных протеинов капсида вируса с вирусной нуклеиновой кислотой названа нуклеокапсидом. Некоторые простые вирусы могут формировать кристаллы (например, вирус ящура).
Капсид включает повторяющиеся морфологические субъединицы - капсомеры, скомпонованные из нескольких полипептидов. Нуклеиновая кислота вириона, связываясь с капсидом, образует нуклеокапсид. Капсид защищает нуклеиновую кислоту от деградации. У простых вирусов капсид участвует в прикреплении (адсорбции) к клетке хозяина. Простые вирусы выходят из клетки в результате ее разрушения (лизиса).
Сложные, или оболочечные, вирусы (рис. 2.11), кроме капсида, имеют мембранную двойную липопротеиновую оболочку (синоним: суперкапсид, или пеплос), которая приобретается путем почкования вириона через мембрану клетки, например через плазматическую мембрану, мембрану ядра или мембрану эндоплазматического ретикулума. На оболочке вируса расположены гликопротеиновые шипы,
или шипики, пепломеры. Разрушение оболочки эфиром и другими растворителями инактивирует сложные вирусы. Под оболочкой некоторых вирусов находится матриксный белок (М-белок).
Вирионы имеют спиральный, икосаэдрический (кубический) или сложный тип симметрии капсида (нуклеокапсида). Спиральный тип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вирусов гриппа, коронавирусов): капсомеры уложены по спирали вместе с нуклеиновой кислотой. Икосаэдрический тип симметрии обусловлен образованием изометрически полого тела из капсида, содержащего вирусную нуклеиновую кислоту (например, у вируса герпеса).
Капсид и оболочка (суперкапсид) защищают вирионы от воздействия окружающей среды, обусловливают избирательное взаимодействие (адсорбцию) своими рецепторными белками с опреде-
Рис. 2.11.
Строение оболочечных вирусов с икосаэдрическим (а) и спиральным (б) капсидом
ленными клетками, а также антигенные и иммуногенные свойства вирионов.
Внутренние структуры вирусов называют сердцевиной. У аденовирусов сердцевина состоит из гистоноподобных белков, связанных с ДНК, у реовирусов - из белков внутреннего капсида.
Лауреат Нобелевской премии Д. Балтимор предложил систему балтиморской классификации, основанной на механизме синтеза мРНК. Эта классификация размещает вирусы в 7 группах (табл. 2.3). Международный комитет на таксономии вирусов (ICTV) принял универсальную систему классификации, которая использует такие таксономические категории, как семейство (название оканчивается на viridae), подсемейство (название оканчивается на virinae), род (название оканчивается на virus). Вид вируса не получил биноминального названия, как у бактерий. Вирусы классифицируют по типу нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), ее структуре и количеству нитей. Они имеют двунитевые или однонитевые нуклеиновые кислоты; позитивную (+), негативную (-) полярность нуклеиновой кислоты или смешанную полярность нуклеиновой кислоты, амбиполярную (+, -); линейную или циркулярную нуклеиновую кислоту; фрагментированную или нефрагментированную нуклеиновую кислоту. Учитывают также размер и морфологию вирионов, количество капсомеров и тип симметрии нуклеокапсида, наличие оболочки (суперкапсида), чувствительность к эфиру и дезоксихолату, место размножения в клетке, антигенные свойства и др.
Таблица 2.3. Основные вирусы, имеющие медицинское значение
Продолжение табл. 2.3
Окончание табл. 2.3
Вирусы
поражают животных, бактерии, грибы и растения. Являясь основными
возбудителями инфекционных заболеваний человека, вирусы также участвуют в
процессах канцерогенеза, могут передаваться различными путями, в том
числе через плаценту (вирус краснухи, цитомегаловирус и др.), поражая
плод человека. Они могут приводить и к постинфекционным осложнениям -
развитию миокардитов, панкреатитов, иммунодефицитов и др.
К неклеточным формам жизни, кроме вирусов, относят прионы и вироиды. Вироиды - небольшие молекулы кольцевой, суперспирализованной РНК, не содержащие белок и вызывающие заболевания растений. Патологические прионы - инфекционные белковые частицы, вызывающие особые конформационные болезни в результате изменения структуры нормального клеточного прионового протеина (PrP c ), который имеется в организме животных и человека. PrP с выполняет регуляторные функции. Его кодирует нормальный прионовый ген (PrP-ген), расположенный в коротком плече 20-й хромосомы человека. Прионные болезни протекают по типу трансмиссивных губкообразных энцефалопатий (болезнь Крейтцфельда-Якоба, куру и др.). При этом прионный протеин приобретает другую, инфекционную форму, обозначаемую как PrP sc (sc от scrapie - скрепи - прионная инфекция овец и коз). Этот инфекционный прионный протеин имеет вид фибрилл и отличается от нормального прионного протеина третичной или четвертичной структурой.
Задания для самоподготовки (самоконтроля)
А. Отметьте микробы, являющиеся прокариотами:
2. Вирусы.
3. Бактерии.
4. Прионы.
Б. Отметьте отличительные особенности прокариотической клетки:
1. Рибосомы 70S.
2. Наличие пептидогликана в клеточной стенке.
3. Наличие митохондрий.
4. Диплоидный набор генов.
В. Отметьте составные компоненты пептидогликана:
1. Тейхоевые кислоты.
2. N-ацетилглюкозоамин.
3. Липополисарид.
4. Тетрапептид.
Г. Отметьте особенности строения клеточной стенки грамотрицательных бактерий:
1. Мезодиаминопимелиновая кислота.
2. Тейхоевые кислоты.
4. Белки-порины.
Д. Назовите функции спор у бактерий:
1. Сохранение вида.
2. Жароустойчивость.
3. Расселение субстрата.
4. Размножение.
1. Риккетсии.
2. Актиномицеты.
3. Спирохеты.
4. Хламидии.
Ж. Назовите особенности актиномицет:
1. Имеют термолабильные споры.
2. Грамположительные бактерии.
3. Отсутствует клеточная стенка.
4. Имеют извитую форму.
З. Назовите особенности спирохет:
1. Грамотрицательные бактерии.
2. Имеют двигательный фибриллярный аппарат.
3. Имеют извитую форму.
И. Назовите простейшие, обладающие апикальным комплексом, позволяющим проникать внутрь клетки:
1. Малярийный плазмодий.
3. Токсоплазма.
4. Криптоспоридии.
К. Назовите отличительную особенность сложноорганизованных вирусов:
1. Два типа нуклеиновой кислоты.
2. Наличие липидной оболочки.
3. Двойной капсид.
4. Наличие неструктурных белков. Л. Отметьте высшие грибы:
1. Mucor.
2. Candida.
3. Penicillium.
4. Aspergillus.
Бактерии это самый древний организм на земле, а также самый простой в своем строении. Он состоит всего из одной клетки, которую можно увидеть и изучить только под микроскопом. Характерным признаком бактерий является отсутствие ядра, вот почему бактерии относят к прокариотам.
Некоторые виды образовывают небольшие группы клеток, такие скопления могут быть окружены капсулой (чехлом). Размер, форма и цвет бактерии сильно зависит от окружающей среды.
По форме бактерии различаются на: палочковидные (бациллы), сферические (кокки) и извитые (спириллы). Встречаются и видоизмененные – кубические, С-образные, звездчатые. Их размеры колеблются от 1 до 10мкм. Отдельные виды бактерий могут активно передвигаться при помощи жгутиков. Последние иногда превышают размер самой бактерии в два раза.
Виды форм бактерий
Для движения бактерии используют жгутики, количество которых бывает различное – один, пара, пучок жгутиков. Расположение жгутиков также бывает разным – с одной стороны клетки, по бокам или равномерно распределены по всей плоскости. Также одним из способов передвижения считается скольжение благодаря слизи, которой покрыт прокариот. У большинства внутри цитоплазмы есть вакуоли. Регулировка ёмкости газа в вакуолях помогает им двигаться в жидкости вверх или вниз, а также перемещаться по воздушных каналах почвы.
Ученые открыли более 10 тысяч разновидностей бактерий, но по предположениям научных исследователей в мире существует их более миллиона видов. Общая характеристика бактерий дает возможность определиться с их ролью в биосфере, а также изучить строение, виды и классификацию царства бактерий.
Простота строения и быстрота адаптации к окружающим условиям помогла бактериям распространиться в широком диапазоне нашей планеты. Они существуют везде: вода, почва, воздух, живые организмы – всё это максимально приемлемое место обитания для прокариотов.
Бактерии находили как на южном полюсе, так и в гейзерах. Они есть на океанском дне, а также в верхних слоях воздушной оболочки Земли. Бактерии живут везде, но их количество зависит от благоприятных условий. К примеру, большая численность видов бактерий проживает в открытых водоемах, а также почве.
Клетка бактерии отличается не только тем, что в ней нет ядра, но и отсутствием митохондрий и пластид. ДНК данного прокариота находится в специальной ядерной зоне и имеет вид замкнутого в кольцо нуклеоида. У бактерии строение клетки состоит из клеточной стенки, капсулы, капсулоподобной оболочки, жгутиков, пили и цитоплазматичной мембраны. Внутреннее строение оформляют цитоплазма, гранулы, мезосомы, рибосомы, плазмиды, включения и нуклеоид.
Клеточная стенка бактерии выполняет функцию обороны и опоры. Вещества могут свободно протекать сквозь неё, благодаря проницаемости. Данная оболочка имеет в своем составе пектин и гемицеллюлозу. Некоторые бактерии выделяют особую слизь, которая может помочь защититься от пересыхания. Слизь формирует капсулу – полисахарид по химическому составу. В такой форме бактерия способна переносить даже очень большие температуры. Также она выполняет и другие функции, к примеру слипание с любыми поверхностями.
На поверхности клетки бактерии находятся тонкие белковые ворсинки – пили. Их может быть большая численность. Пили помогают клетке передавать генетический материал, а также обеспечивают слипание с другими клетками.
Под плоскостью стенки находится трехслойная цитоплазматичная мембрана. Она гарантирует транспорт веществ, а также имеет немалую роль в образовании спор.
Цитоплазма бактерий на 75 процентов произведена из воды. Состав цитоплазмы:
Обмен веществ у прокариотов возможен, как с участием кислорода, так и без его него. Большая их часть питаются уже готовыми питательными веществами органического происхождения. Очень мало видов способны сами синтезировать органические вещества из неорганических. Это сине-зеленые бактерии и цианобактерии, которые отыграли немалую роль в формировании атмосферы и насыщении её кислородом.
В условиях, благоприятных для размножения, оно осуществляется почкованием или вегетативно. Бесполое размножение происходит в такой последовательности:
При таком способе размножения нету обмена генетической информацией, поэтому все дочерние клетки будут точной копией материнской.
Процесс размножения бактерий в неблагоприятных условиях более интересен. О способности полового размножения бактерий ученые узнали сравнительно недавно – в 1946 году. У бактерий нет разделения на женские и половые клетки. Но ДНК у них встречается разнополое. Две такие клетки при приближении друг к другу образовывают канал для передачи ДНК, происходит обмен участками – рекомбинация. Процесс довольно длительный, результатом которого являются две совершенно новые особи.
Большинство бактерий очень сложно увидеть под микроскопом, так как они не имеют своей окраски. Немногие разновидности имеют пурпурный или зеленый окрас, благодаря содержанию в них бактериохлорофилла и бактериопурпурина. Хотя если рассматривать некоторые колонии бактерий, становится ясно, что они выделяют окрашиваемые вещества в среду обитания и приобретают яркую окраску. Для того, чтобы подробней изучать прокариотов, их окрашивают.
Классификация бактерий может быть основана на таких показателях, как:
Бактерии симбионты живут в содружестве с иными организмами.
Бактерии сапрофиты проживают на уже отмерших организмах, продуктах и органических отходах. Они способствуют процессам гниения и брожения.
Гниение очищает природу от трупов и других отходов органического происхождения. Без процесса гниения не было бы круговорота веществ в природе. Так в чем же состоит роль бактерий в круговороте веществ?
Бактерии гниения - это помощник в процессе расщепления белковых соединений, а также жиров и других соединений, содержащих в себе азот. Проведя сложную химическую реакцию, они разрывают связи между молекулами органических организмов и захватывают молекулы белка, аминокислот. Расщепляясь, молекулы высвобождают аммиак, сероводород и другие вредные вещества. Они ядовиты и могут вызывать отравление у людей и животных.
Бактерии гниения быстро размножаются в благоприятных для них условиях. Так как это не только полезные бактерии, но и вредные, то чтобы не допустить преждевременного гниения у продуктов, люди научились их обрабатывать: сушить, мариновать, солить, коптить. Все эти способы обработки убивают бактерии и не дают им размножаться.
Бактерии брожения при помощи ферментов способны расщеплять углеводы. Эту способность люди заметили еще в древние времена и используют такие бактерии для изготовления молочнокислых продуктов, уксусов, а также других продуктов питания до сих пор.
Бактерии, трудясь в совокупности с другими организмами, делают очень важную химическую работу. Очень важно знать какие есть виды бактерий и какую пользу или вред приносят для природы.
Выше уже отмечалось большое значение многих видов бактерий (при процессах гниения и различных типах брожения), т.е. выполнение санитарной роли на Земле.
Бактерии также играют огромную роль в круговороте углерода, кислорода, водорода, азота, фосфора, серы, кальция и других элементов. Многие виды бактерий способствуют активной фиксации атмосферного азота и переводят его в органическую форму, способствуя повышению плодородия почв. Особо важное значение имеют те бактерии, которые разлагают целлюлозу, являющиеся основным источником углерода для жизнедеятельности почвенных микроорганизмов.
Сульфатредуцирующие бактерии участвуют в образовании нефти и сероводорода в лечебных грязях, почвах и морях. Так, насыщенный сероводородом слой воды в Черном море является результатом жизнедеятельности сульфатредуцирующих бактерий. Деятельность этих бактерий в почвах приводит к образованию соды и содового засоления почвы. Сульфатредуцирующие бактерии переводят питательные вещества в почвах рисовых плантаций в такую форму, которая становится доступной для корней этой культуры. Эти бактерии могут вызывать коррозию металлических подземных и подводных сооружений.
Благодаря жизнедеятельности бактерий почва освобождается от многих продуктов и вредных организмов и насыщается ценными питательными веществами. Бактерицидные препараты успешно используются для борьбы с многими видами насекомых-вредителей (кукурузным мотыльком и др.).
Многие виды бактерий используются в различных отраслях промышленности для получения ацетона, этилового и бутилового спиртов, уксусной кислоты, ферментов, гормонов, витаминов, антибиотиков, белково-витаминных препаратов и т.д.
Без бактерий невозможны процессы при дублении кожи, сушке листьев табака, выработке шелка, каучука, обработке какао, кофе, мочении конопли, льна и других лубоволокнистых растений, квашении капусты, очистке сточных вод, выщелачивании металлов и т.д.
БАКТЕРИИ (греческий bakterion палочка) - разнообразная по биол, свойствам группа широко распространенных на Земле микроскопических, в основном одноклеточных, организмов, принадлежащих к низшим формам жизни.
Первые сведения о бактериях были получены в 17 веке из исследований Левенгука, обнаружившего их основные формы. Бактерии могут существовать в самых разнообразных условиях.
Большинство их лишено хлорофилла. Исключение составляют анаэробные пурпурные и зеленые серобактерии, а также несерные пурпурные бактерии, содержащие хлорофилл и использующие солнечную энергию для фотосинтеза. Бактерии могут усваивать неорганический углерод и азот, использовать в качестве источников энергии многие неорганические и органические соединения, осуществлять превращения углерода, азота, серы, железа и других элементов.
Наряду с водорослями бактерии являются одними из самых древних организмов на Земле. Клеточное строение бактерий сходно с сине-зелеными водорослями, актиномицетами (см.) и спирохетами (см.), с которыми, как полагают, бактерии связаны филогенетически. Среди бактерий имеются виды, вызывающие заболевания у человека, животных и высших растений.
Первые попытки классифицировать бактерии по морфологическим признакам были предприняты в 18 веке. Позднее в основу классификации были положены физиологические признаки. В качестве таксономических признаков применялись наиболее стабильные - форма, окраска по Tpainy (см. Грама метод), спорообразование, тип дыхания, биохимические, антигенные и другие свойства, однако до наст, времени не создано классификации, построенной на принципе филогенетического родства бактерий с учетом эволюционных связей.
Широкое распространение получила классификация Берджи (D. Bergey, 1957), в основу которой положены международные правила номенклатуры бактерий. Номенклатура выдержана в биноминальной системе, принятой в зоологических и ботанических классификациях (см. табл. 1). В качестве таксономических признаков взяты различные биологические свойства бактерий.
Таблица 1
Класс Schizomycetes |
||
---|---|---|
семейство |
||
Патогенные бактерии |
||
Pseudomonadales (неподвижные клетки с полярными жгутиками) |
||
Eubacteriales (кокковидные, палочковидные бактерии с перитрихиальными жгутиками и неподвижные формы) |
||
Lactobacil laceae |
||
Peptostreptococcus |
||
Enterobacteriaceae |
||
Corynebacteriaceae |
||
Actinomycetales (нитевидные, ветвящиеся клетки - актиномицеты) |
Mycobacteriaceae |
|
Actinomycetaceae |
||
Streptomycetaceae |
||
Spirochaetales (подвижные, неригидные бактерии, у которых цитоплазма спирально закручена вокруг осевой нити) |
||
Mycoplasmatales (мелкие полиморфные, фильтрующиеся формы) |
Mycoplasmataceae |
|
Acholeplasmataceae |
||
Непатогенные бактерии |
||
Chlamydobacteriales |
||
Hyphomicrobiales |
||
Приведенные в таблице 1 микоплазмы - мельчайшие образования, отграниченные вместо ригидной клеточной стенки только цитоплазматической мембраной, существенно отличающиеся от бактерий, выделены в настоящее время в отдельный класс - Mollicutes (см. Mycoplasmataceae).
Существует три основные формы бактерий - шаровидная, палочковидная и спиралевидная (рис. 1); большая группа нитчатых бактерий объединяет преимущественно водные бактерии и не содержит патогенных видов.
Шаровидные Ббактерии - кокки , подразделяются в зависимости от расположения клеток после деления на несколько групп: 1) диплококки (делятся в одной плоскости и располагаются парами); 2) стрептококки (делятся в одной плоскости, но при делении не отделяются друг от друга и образуют цепочки); 3) тетракокки (делятся в двух взаимно перпендикулярных плоскостях, образуя группы по четыре особи); 4) сарцины (делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях, образуя группы кубической формы); 5) стафилококки (делятся в нескольких плоскостях без определенной системы, образуя скопления, напоминающие виноградные грозди). Средний размер кокков 0,5-1 мкм (см. Кокки).
Палочковидные бактерии имеют строго цилиндрическую или овоидную форму, концы палочек могут быть ровными, закругленными, заостренными. Палочки могут располагаться попарно в виде цепочек, но большинство видов располагается без определенной системы. Длина палочек варьирует от 1 до 8 мкм, средний диаметр 0,5-2 мкм. Принято собственно бактериями называть палочки, не образующие спор (см. Споры). Бактерии, образующие споры, называются бациллами. По принятой номенклатуре к бациллам относят аэробные формы. Анаэробных спорообразующих бактерий относят к клостридиям. Спорообразование у бацилл и клостридий не связано с процессом размножения. Споры у них относятся к типу эндоспор, представляющих собой круглые или овальные тела, преломляющие свет и окрашивающиеся по специальным методам (цветн. рис. 1 и 2). Расположение спор в клетке, их величина и форма характерны для каждого вида бактерий (рис. 2). Некоторые палочки (микобактерии, коринебактерии) образуют нитевидные особи, другие (клубеньковые бактерии) образуют разветвленные, звездчатые формы - так называемые бактероиды (рис. 3).
Спиралевидные формы бактерий подразделяют на вибрионы и спириллы. Изогнутость тел вибрионов не превышает одной четверти оборота спирали. Спириллы образуют изгибы из одного или нескольких оборотов (см. Вибрионы , Спириллы).
Некоторые бактерии обладают подвижностью, что отчетливо видно при наблюдении методом висячей капли (см.) или другими методами. Подвижные бактерии активно передвигаются с помощью особых органелл - жгутиков (см. Жгутики бактериальные) либо за счет скользящих движений (миксобактерии).
Капсула имеется у ряда бактерий и является их внешним структурным компонентом (рис. 4 и цветн. рис. 3). У ряда бактерий аналогично капсуле имеется образование в виде тонкого слизистого слоя на поверхности клетки. У некоторых бактерий капсула формируется в зависимости от условий их существования. Одни бактерии образуют капсулы только в макроорганизме, другие - как в организме, так и вне его, в частности на питательных средах, содержащих повышенные концентрации углеводов. Некоторые бактерии образуют капсулы независимо от условий существования (см. Капсульные бактерии). В состав капсулы большинства бактерий входят полимеризованные полисахариды, состоящие из пентоз и аминосахаров, уроновые кислоты, полипептиды и белки. Капсула не является аморфным образованием, а определенным образом структурирована. У некоторых бактерий, например, пневмококков, капсула определяет их вирулентность, а также некоторые антигенные свойства бактериальной клетки.
Клеточная стенка бактерий определяет их форму и обеспечивает сохранение внутреннего содержимого клетки. По особенностям химического состава и структуры клеточной стенки бактерии дифференцируют с помощью окрашивания по Граму.
Строение клеточной стенки различно у грамположительных и грамотрицательных бактерий. Основным слоем клеточной стенки, характерным для всех видов бактерий, является ригидный слой (синоним: мукопептидный слой, муреин, пептидогликан; последнее название наиболее соответствует химическому строению слоя), в состав которого вводят повторяющиеся остатки аминосахаров - N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, образующих основу линейного полимера - муреина.
С остатком N-ацетилмурамовой кислоты соединен полипептид, состоящий у большинства бактерий из четырех аминокислотных остатков - L-алани-на, D-глутаминовой кислоты, L-лизина или диаминопимелиновой кислоты (ДАП) и D-аланина в молярном отношении 1: 1: 1: 1. В составе пептида в зависимости от вида бактерий могут наблюдаться вариации. Лизин или ДАП могут быть заменены орнитином, 2,6-диаминобутаровой кислотой и др. Иногда к остатку глутаминовой кислоты присоединена добавочная аминокислота. Пептидные цепи соединены друг с другом с помощью перекрестных полипептидных цепочек, состав которых широко варьирует у разных видов бактерий. Перекрестные связи, например, у стафилококка, образованы пентаглициновыми мостиками, соединяющими D-аланин одной пептидной единицы с лизином другой. У некоторых бактерий перекрестные связи идентичны пептидным единицам. У E. coli пептидные цепи соединены непосредственно друг с другом через D-аланин одной цепи и ДАП другой. Схематическое изображение пептидогликана представлено на рис. 5.
У грамположительных бактериях в дополнение к пептидогликану имеются тейхоевые кислоты (рибит-тейхоевые и глицерин-тейхоевые), также образующие полимер и ковалентно связанные с пептидогликаном. У некоторых бактериях обнаружены тейхуроновые и 2-аминоманнуровая кислоты.
В состав клеточных стенок грамотрицательных бактерий, кроме ригидного слоя, входят липопротеиновый и липополисахаридный слои. Липополисахаридный слой (Л ПС) наиболее изучен у энтеробактерий, и особенно сальмонелл. Л ПС представляет собой комплекс фосфорилирование гетерополисахаридов, ковалентно связанных с содержащим глюкозамин липидом (липид А). В состав Л ПС входит О-антиген клетки (у энтеробактерий). Полисахаридная часть Л ПС состоит из основной (базисной) структуры и О-антигенной части. В состав базисной части, присущей всем энтеробактериям, входят гептоза, 2-кето-З-дезоксиоктонат (КДО), глюкоза, галактоза и N-ацетил-глюкозамин. Через КДО базисная часть присоединена к компоненту, состоящему из липида А, этанол амина, фосфата и КДО. С другой стороны (наружной) к базисной структуре присоединены боковые цепи, образованные повторяющимися олигосахаридными единицами. Наружные полисахаридные цепи видоспецифичны и являются соматическими О-антигенами. О-специфичность определяется углеводным составом всей боковой цепи, последовательностью расположения в ней углеводов и концевым сахаром, 6-дезокси- или 3,6-дидезоксигексозой. Наследственные нарушения в биосинтезе ЛПС энтеробактерий базисной части или O-боковых цепей приводят к появлению R-форм мутантов (см. Диссоциация бактерий).
Рис. 6. Строение клетки энтеробактерии (схематическое изображение): 1- детерминантные группы О-антигена; 2 - липопротеиновый слой; 3 - жгутик (Н-антиген); 4 - цитоплазматическая мембрана; 5 и б - рибосомы в цитоплазме; 7 - нуклеоид; 8-капсула; 9 - липополисахаридный слой; 10 - ригидный слой клеточной стенки.
Липопротеиновый слой (ЛП) у грамотрицательных бактерий, по представлению Вейделя (Weidel), является наружным слоем клеточной стенки. ЛПС занимает промежуточное положение, наиболее глубоко расположенным является ригидный слой. Эта схема не объясняет обнаружение О-антигена без предварительного разрушения Л П. Поэтому были предложены другие схемы строения стенки, согласно которым ЛП покрывает бактериальную клетку не сплошным слоем, а через него проходит ЛПС в виде «отростков», как это показано на рис. 6. Это представление подтверждено иммунохимическими методами с использованием ферритина при изучении локализации О-антигена.
У некоторых грамположительных бактериях клеточная стенка, так же как и у грамотрицательных, состоит не только из ригидного слоя, но имеет многослойное строение. Например, у стрептококков в ее состав входит белковый слой, промежуточный липополисахаридный и внутренний ригидный слой. Клеточная стенка не является инертной структурой в ферментативном отношении. В ее составе обнаружены аутолитические ферменты, фосфатаза, аденозинтрифосфатаза.
Цитоплазматическая мембрана бактерий прилегает к внутренней поверхности клеточной стенки, отделяет ее от цитоплазмы и является очень важным в функциональном отношении компонентом клетки. В мембране локализованы окислительно-восстановительные ферменты, с системой мембран связаны такие важнейшие функции клетки, как деление, биосинтез ряда компонентов, хемо- и фотосинтез и др. Толщина мембраны у большинства бактерий составляет 7-10 нм. Электронномикроскопическим методом обнаружено, что она состоит из трех слоев: двух электронно-плотных и промежуточного - электронно-прозрачного. В состав мембраны входят белки, фосфолипиды, липопротеины, небольшое количество углеводов и некоторых других соединений. Многие белки мембраны Б. являются ферментами, участвующими в процессах дыхания, а также в биосинтезе компонентов клеточной стенки и капсулы. В составе мембраны определяются также пермеазы, обеспечивающие перенос в клетку растворимых веществ. Мембрана служит осмотическим барьером, она обладает избирательной полупроницаемостью и ответственна за поступление внутрь клетки питательных веществ и выход из нее продуктов обмена.
Помимо цитоплазматической мембраны, в клетке бактерии имеется система внутренних мембран , получивших название мезосом, которые, вероятно, являются производными цитоплазматической мембраны; их строение варьирует у разных видов бактерий. Наиболее развиты мезосомы у грамположительных бактериях. Строение мезосом неоднотипно, их полиморфизм отмечается даже у одного и того же вида бактерий. Внутренние мембранные структуры могут быть представлены простыми инвагинациями цитоплазматической мембраны, образованиями в виде пузырьков или петель (чаще у грамотрицательных бактерий), в виде вакуолярных, ламмелярных, тубулярных образований. Мезосомы чаще всего локализованы у клеточной перегородки (рис. 7), отмечается также их связь с нуклеоидом. Поскольку в мезосомах обнаружены ферменты дыхания и окислительного фосфорилирования, многие авторы считают их аналогами митохондрий клеток высших. Предполагается, что мезосомы принимают участие в делении клетки, распределении дочерних хромосом в разделяющиеся клетки и спорообразовании. С мембранным аппаратом клетки связаны также функции фиксации азота, хемо- и фотосинтеза. Следовательно, можно полагать, что мембраны клетки играют определенного рода координирующую роль в пространственной организации ряда ферментных систем и органелл клетки.
Рис. 4 . Зерна волютина у коринебактерий
Цитоплазма и включения . Внутреннее содержимое клетки состоит из цитоплазмы (см.), представляющей собой сложную смесь различных органических соединений, находящихся в коллоидном состоянии. На ультратонких срезах цитоплазмы (рис. 7) обнаружено большое количество зерен, значительная часть которых является рибосомами. В цитоплазме бактерий могут содержаться внутриклеточные включения (цветн. рис. 4-6) в виде гранул гликогена, крахмала, жировых веществ. У ряда бактерий в цитоплазме находятся гранулы волютина, состоящие из неорганических полифосфатов, метафосфатов и соединений, близких к нуклеиновым кислотам. Роль волютина до конца не ясна. Некоторые авторы на основании его исчезновения при голодании клеток рассматривают волютин как запасные питательные вещества. Волютин обладает сродством к основным красителям, проявляет хромофильность и метахромазию, легко выявляется в клетках в виде крупных гранул, особенно при специальных методах окраски.
Рибосомы бактерии являются местом синтеза белков клетки, в процессе которого образуются структуры, состоящие из большого числа рибосом (до 20), называемые полирибосомами или чаще полисомами (рис. 8). В образовании полисом принимает участие м-РНК. По окончании синтеза данного белка полисомы вновь распадаются на одиночные рибосомы, или субъединицы. Рибосомы могут располагаться свободно в цитоплазме, но значительная их часть связана с мембранами клетки. На ультратонких срезах большинства бактерий рибосомы обнаруживаются в цитоплазме в виде гранул диаметром около 20 нм. Рибосомы E. coli, очищенные в присутствии ионов магния, осаждаются при ультрацентрифугировании со скоростью седиментации 70 S. При более низких концентрациях магния они диссоциируют на две субъединицы с константами седиментации 50 S и 30 S. Полагают, что 50 S частица имеет сферическую, а 30 S - уплощенную форму. При повышении концентрации ионов магния 70 S частицы образуют димеры. В свободном состоянии (вне синтеза белка) рибосомы находятся в диссоциированном состоянии в рибосомной фракции клеток. Диссоциацию рибосом на субъединицы стимулирует специальный фактор диссоциации. 50 S и 30 S субъединицы имеют мол. вес 1,8· 106 и 0,85-106 соответственно. Обе частицы состоят из рибосомальной РНК (или р-РНК) и белка. 50 S частица содержит по одной молекуле 23 S и 5 S р-РНК. 30 S частица содержит одну молекулу 16 S р-РНК. Белковый состав рибосом неоднороден. 30 S частицы состоят из двадцати одного, а 50 S из тридцати-тридцати пяти различных белков. Часть белков 30 S частиц рибосом нужна как для сборки рибосом, так и для их функционирования, другая часть важна только в функциональном отношении. Рибосомальная РНК имеет важное значение для правильной сборки и организации рибосом.
Степень агрегации рибосом регулируется ионами магния. В рибосомах найдены полиамины и рибонуклеаза I, участвующая, как полагают, в гидролизе м-РНК.
Рис. 10. Радиоавтография хромосомы бактерии coli. Видна циркулярнозамкнутая структура; слева вверху - схема репликации: X - начальная точка репликации, Y - точка роста; А - отреплецированный участок; Б - неотреплецированный участок; В - репликационная точка.
Ядро. Бактерии обладают дискретной ядерной структурой, в связи со своеобразием строения получившей название нуклеиида (рис. 9). Нуклеоиды Б. содержат основное количество ДНК клетки. Они окрашиваются методом Фейльгена (см. Дезоксирибонуклеиновые кислоты), хорошо видны при окраске по Романовскому - Гимзе (см. Романовского - Гимзы метод), после кислотного гидролиза или в живом состоянии при фазово-контрастной микроскопии, а также на ультратонких срезах в электронном микроскопе (рис. 7 и 9). Нуклеоид определяется в виде компактного одиночного или двойного образования. У растущих культур нуклеоиды часто выглядят в виде раздвоенных образований, что отражает их деление. Митотического деления ядерных структур у бактерий не обнаружено. Форма нуклеоидов и их распределение в клетке весьма изменчивы и зависят от ряда причин, в том числе и от возраста культуры. На электронных микрофотографиях в местах расположения нуклеоидов видны светлые участки меньшей оптической плотности. Ядерная вакуоль не отделена от цитоплазмы ядерной оболочкой. Форма вакуоли не постоянна. Ядерные участки заполнены пучками тонких нитей, образующих сложное переплетение. В составе ядерных структур бактерий не обнаружены гистоны (см.); предполагают, что их роль у бактерий выполняют полиамины. Ядра бактерий не похожи на ядра других организмов. Это послужило основой для выделения бактерий в группу прокариотов, в отличие от эукариотов, обладающих ядром, содержащим хромосомы, оболочку и делящимся путем митоза. Нуклеоид бактерии соединен с мезосомой. Характер связи пока не известен. Хромосома бактерий имеет циркулярно замкнутую структуру. Это было показано методом радиоавтографии у E. coli (рис. 10), предварительно меченных 3Н-тимидином. О структуре ДНК судили по распределению зерен меченого тимидина. Подсчитано, что длина замкнутой в кольцо ДНК клетки составляет 1100-1400 мкм, а молекулярный вес 2,8· 109 [Кернс (J. Cairns), 1963].
Жгутики и ворсинки . На поверхности некоторых бактерий имеются органеллы движения - жгутики (рис. 11). Их можно обнаружить с помощью особых методов окраски, микроскопирования в темном поле или в электронном микроскопе. Жгутики имеют спиралевидную форму, причем шаг спирали специфичен для каждого вида бактерий. На основании количества жгутиков и их расположения на поверхности клетки различают следующие группы подвижных микробов: монотрихи, амфитрихи, лофотрихи и перитрихи. Монотрихи имеют один жгутик, расположенный на одном из полюсов клетки и реже субполярно или латерально. У амфитрихов на каждом полюсе клетки расположено по одному жгутику. Лофотрихи имеют пучок жгутиков на одном или двух полюсах клетки. У перитрихов жгутики распределены без определенного порядка по всему телу клетки.
М. А. Пешков (1966) предлагает несколько другую терминологию. Амфи- и лофотрихи он объединяет термином «мультрихи» и выделяет смешанный тип, имеющий два или более жгутиков разного вида в разных точках прикрепления. Основание жгутиков (блефаропласт) расположено в цитоплазматической мембране. Жгутики почти целиком состоят из белка - флагеллина.
На поверхности некоторых бактерий (энтеробактерии), кроме жгутиков, имеются ворсинки (фимбрии, пили), видимые только под электронным микроскопом (рис. 12). Различают несколько морфологических типов ворсинок. Наиболее полно изучен первый тип (общий) и ворсинки, существующие только при наличии в клетке половых факторов (см. Половой фактор бактерий). Ворсинки общего типа покрывают всю поверхность клетки, состоят из белка; половых ворсинок приходится 1-4 на клетку. И те и другие обладают антигенной активностью (см. Конъюгация у бактерий).
По химическому составу бактерии не отличаются от других организмов.
В состав бактерий входят углерод, азот, водород, кислород, фосфор, сера, кальций, калий, магний, натрий, хлор и железо. Их содержание зависит от вида бактерии и условий культивирования. Обязательным химическим компонентом клеток бактерий, как и других организмов, является вода, представляющая собой универсальную дисперсионную среду живой материи. Основная часть воды находится в свободном состоянии; ее содержание различно у разных бактерий и составляет 70-85% влажного веса бактерий. Кроме свободной, имеется ионная фракция воды и вода, связанная с коллоидными веществами. По составу органических компонентов клетки бактерий сходны с клетками других организмов, отличаясь, однако, наличием некоторых соединений. В состав бактерий входят белки, нуклеиновые кислоты, жиры, моно-, ди- и полисахариды, аминосахара и др. У бактерий имеются необычные аминокислоты: диаминопимелиновая (содержащаяся еще у сине-зеленых водорослей и риккетсий); N-метиллизин, входящий в состав флагеллина некоторых бактерий; D-изомеры некоторых аминокислот. Содержание нуклеиновых кислот зависит от условий культивирования, фаз роста, физиологического и функционального состояния клеток. Содержание ДНК в клетке более постоянно, нежели РНК. Нуклеотидный состав ДНК неизменен в процессе развития бактерий, видоспецифичен и используется как один из важнейших таксономических признаков. Бактериальные липиды разнообразны. Среди них встречаются жирные кислоты, фосфолипиды, воски, стероиды. Некоторые бактерии образуют пигменты (цветн. рис. 7-9) с интенсивностью, которая широко варьирует у одного и того же вида и зависит от условий выращивания. Твердые питательные среды более благоприятны для образования пигментов. По химическому строению различают каратиноидные, хиноновые, меланиновые и другие пигменты, которые могут быть красного, оранжевого, желтого, коричневого, черного, синего или зеленого цвета. Чаще пигменты нерастворимы в питательных средах и окрашивают только клетки. Пигменты, растворимые в воде (пиоцианин), диффундируют в среду, окрашивая ее. К пигментам бактерий относится также бактериохлорофилл, придающий фиолетовую или зеленую окраску некоторым фотосинтезирующим бактериям.
Ферменты бактерий делятся на функционирующие только внутри клетки (эндоферменты) и только вне клетки (экзоферменты). Эндоферменты в основном катализируют синтетические процессы, дыхание и т. п. Экзоферменты катализируют главным образом гидролиз высокомолекулярных субстратов до соединения с более низким молекулярным весом, способных проникать внутрь клетки.
В клетке ферменты связаны с соответствующими структурами и органеллами. Например, аутолитические ферменты связаны с клеточной стенкой, окислительно-восстановительные ферменты - с цитоплазматической мембраной, ферменты, связанные с репликацией ДНК,- с мембраной или нуклеоидом.
Активность ферментов зависит от ряда условий, в первую очередь от температуры выращивания бактерий и pH среды. Понижение температуры обратимо снижает, а повышение до определенных пределов (40-42°) повышает активность ферментов. У термофильных и психрофильных бактерий оптимум активности ферментов совпадает с оптимальной температурой роста. Оптимальная температура для мезофильных бактерий, к которым принадлежат патогенные бактерии, примерно равна 37°. Оптимум pH в основном лежит в пределах 4-7. Встречаются вариации оптимума pH. Ферменты бактерий, активность которых не зависит от присутствия субстрата в среде культивирования, называют конститутивными. Ферменты, синтез которых зависит от наличия субстрата в среде, называются индуцируемыми (старое название - адаптивные). Например, образование β-галактозидазы у кишечной палочки начинается только при добавлении в среду лактозы, которая индуцирует синтез этого фермента.
Контроль синтеза ферментов осуществляется путем ингибирования конечным продуктом или путем индукции и репрессии.
Ферментативная активность бактерий используется для их идентификации, чаще всего при этом изучаются сахаролитические и протеолитические свойства. Некоторые ферменты, образуемые патогенными бактериями, являются факторами вирулентности (см.).
Питание . Бактерии используют питательные вещества только в виде относительно небольших молекул, проникающих внутрь клетки. Такой способ питания, характерный для всех организмов растительного происхождения, называют голофитным. Сложные органические вещества (белок, полисахариды, клетчатка и др.) могут служить источником питания и энергии только после их предварительного гидролиза до более простых соединений, растворимых в воде либо в липоидах. Способность различных соединений проникать в цитоплазму клеток зависит от проницаемости цитоплазматической мембраны и химические структуры питательного вещества.
Вещества, которые служат источником питания бактерий, поразительно разнообразны. Важнейшим элементом, необходимым для живых организмов, является углерод. Одни виды бактерий (аутотрофы) могут использовать неорганический углерод из углекислоты и ее солей (см. Аутотрофные организмы), другие (гетеротрофы) - только из органических соединений (см. Гетеротрофные организмы). Подавляющее большинство бактерий относится к гетеротрофам. Для усвоения углерода требуется посторонний источник энергии. Немногочисленные виды бактерий, обладающие фотосинтетическими пигментами, используют энергию солнечного света. Эти бактерии называются фотосинтезирующими. Среди них имеются аутотрофы (зеленые и пурпурные серобактерии) и гетеротрофы (несерные пурпурные бактерии). Их называют также соответственно фотолитотрофами и фотоорганотрофами. Большинство же бактерий использует энергию химических реакций и называется хемосинтезирующими. Хемосинтезирующие аутотрофы называются хемолитотрофами, а гетеротрофы - хемоорганотрофами.
Гетеротрофные бактерии усваивают углерод из органических соединений различной химической природы. Легко усваиваются вещества, содержащие ненасыщенные связи или атомы углерода с частично окисленными валентностями. В связи с этим наиболее доступными источниками углерода являются сахара, многоатомные спирты и др. Некоторые гетеротрофы наряду с усвоением органического углерода могут усваивать и неорганический углерод.
Отношение к источникам азота также различно. Существуют бактерии, усваивающие минеральный и даже атмосферный азот. Другие бактерии неспособны синтезировать белковую молекулу или некоторые аминокислоты из простейших соединений азота. В этой группе имеются формы, использующие азот из отдельных аминокислот, из пептонов, сложных белковых веществ и из минеральных источников азота с добавлением несинтезируемых ими аминокислот. К этой группе принадлежат многие патогенные бактерии.
Дыхание . Часть веществ, проникающих внутрь бактериальной клетки, окисляясь, снабжает ее необходимой энергией. Этот процесс называют биол, окислением или дыханием.
Биологическое окисление сводится в основном к двум процессам: дегидрированию субстрата с последующим переносом электронов к конечному акцептору и накоплению в биологически доступной форме высвобождающейся энергии. Конечным акцептором электронов могут служить кислород, некоторые органические и неорганические соединения. При аэробном дыхании конечным акцептором электронов является кислород. Энергетические процессы, в которых конечным акцептором электронов является не кислород, а другие соединения, называются анаэробным дыханием, причем к собственно анаэробному дыханию некоторые исследователи относят те процессы, когда конечным акцептором электронов являются неорганические соединения (нитраты и сульфаты).
Под брожением понимают такие энергетические процессы, в которых органические соединения выступают одновременно как доноры и как акцепторы электронов.
Среди бактерий имеются строгие аэробы (см.), развивающиеся только в присутствии кислорода, облигатные анаэробы, развивающиеся только в отсутствие кислорода, и факультативные анаэробы (см.), способные к развитию и в аэробных и в анаэробных условиях. Большинство бактерий обладает пространственно организованной системой дыхательных ферментов, получившей название дыхательной цепи или цепи переноса электронов.
Дыхание у бактерий, подобно дыханию других организмов, сопряжено с процессами окислительного фосфорилирования, сопровождается образованием соединений, богатых макроэргическими связями (АТФ). Энергия, накапливающаяся в этих соединениях, используется по мере необходимости.
В качестве источника энергии бактерии могут использовать разнообразные органические соединения (углеводы, азотсодержащие вещества, жиры и жирные кислоты, органические кислоты и др.). Способность получать энергию в результате окисления неорганических соединений присуща лишь небольшой группе бактерий. Неорганические вещества, окисляемые ими, специфичны для каждого вида бактерий. К этим бактериям относятся нитрифицирующие бактерии, серобактерии, железобактерии и др. Среди них имеются и аэробы и анаэробы.
Фотосинтезирующие бактерии превращают энергию видимого света непосредственно в АТФ; этот процесс, осуществляемый в ходе фотосинтеза, называют фотофосфорилированием.
Бактериальная клетка начинает делиться после завершения последовательных реакций, связанных с воспроизведением ее компонентов.
Наиболее важным процессом роста клетки является воспроизведение ее наследственного аппарата. Разделению нуклеоида предшествуют процессы репликации ДНК (см. Репликация). Репликация начинается, когда отношение ДНК/белок клетки достигнет определенного уровня. Для инициации репликации требуется синтез специфических белковых продуктов. На реплицирующейся ДНК клетки при изучении ауторадиографическим методом различают две точки: точку начала репликации и точку роста (рис. 10). Репликативная точка продвигается по всей ДНК клетки, имеющей, как отмечалось, циркулярно замкнутую структуру. Время прохождения точки репликации от начала до конца всей циркулярной структуры ДНК, или время синтеза ДНК, постоянно и не зависит от скорости роста клеток. У быстро растущих культур, когда время генерации (время, протекающее между делением клеток) меньше, чем время, необходимое для репликации ДНК (40-47 минут у E. coli B/r), новая инициация начинается до окончания предыдущей. Таким образом, у быстро растущих культур имеется несколько репликационных точек (вилок). Процесс репликации ДНК сопровождается сегрегацией синтезирующихся цепей ДНК во вновь образующиеся дочерние клетки. В разделении нитей ДНК большую роль играют мезосомы клетки.
Рост палочковидных клеток во время цикла генерации сводится к экспоненциальному увеличению их длины. Во время деления рост клетки замедляется и начинается вновь после деления.
Окончание репликации ДНК является моментом, инициирующим деление клетки. Угнетение синтеза ДНК до окончания репликации приводит к нарушению процесса деления: клетка перестает делиться и растет в длину. На примере E. coli показано, что для начала деления требуется наличие термолабильного белка и такое соотношение между отдельными полиаминами в клетке, при котором количество путресцина должно превышать количество спермидина. Имеются данные о значении фосфолипидов и аутолизинов для процесса деления клеток.
У растущей культуры бактерий синтезируется полный набор рибосом. Рибосомальная РНК первоначально синтезируется на ДНК-матрице, затем модифицируется и превращается в зрелые 16 S и 23 S р-РНК. 5 S р-РНК также не является прямым продуктом транскрипции (см.). Предшественники рибосом не содержат полного набора рибосомальных белков. Полный набор появляется только в процессе созревания.
Механизм воспроизведения мезосом, как и мембранного аппарата клетки, еще не ясен. Предполагают, что при росте бактериальной клетки мезосомы постепенно разделяются.
При росте бактериальной клетки клеточная перегородка формируется рядом с мезосомой (рис. 7). Образование перегородки приводит к делению клетки. Вновь образованные дочерние клетки отделяются друг от друга. У некоторых бактерий образование перегородки не приводит к разделению клеток: образуются многокамерные клетки.
Получен ряд мутантов у E. coli, у которых клеточная перегородка образуется либо в необычном месте, либо наряду с перегородкой с обычной локализацией формируется добавочная перегородка близко от полюса клетки. В результате деления таких мутантов образуются как обычные клетки, так и маленькие клетки (мини-клетки) размером 0,3-0,5 мкм. Мини-клетки лишены, как правило, ДНК, так как при делении родительской клетки нуклеоид не попадает в них. В связи с отсутствием ДНК миниклетки используются в генетике бактерий для изучения выражения функции генов у внехромосомных факторов наследственности и других вопросов.
При выращивании в жидких питательных средах скорость роста популяции клеток изменяется во времени. Рост популяции бактерий разделяют на несколько фаз. После посева клеток в свежую питательную среду некоторое время бактерии не размножаются - эту фазу называют начальной стационарной или лаг-фазой. Лаг-фаза переходит в фазу положительного ускорения. В этой фазе начинается деление бактерий. Когда скорость роста клеток всей популяции достигает постоянной величины, начинается логарифмическая фаза размножения. В этот период можно рассчитать время генерации, количество генераций и некоторые другие показатели. Логарифмическая фаза сменяется фазой отрицательного ускорения, затем наступает стационарная фаза. Количество жизнеспособных клеток в данной фазе постоянно (М-концентрация - максимальная концентрация жизнеспособных клеток). Затем следует фаза отмирания популяции. На скорость роста популяции влияют: вид культуры бактерий, возраст посеянной культуры, состав питательной среды, температура выращивания, аэрация и др.
Во время роста популяции клеток в них накапливаются продукты обмена, происходит истощение питательных веществ и другие процессы, ведущие к переходу в стационарную и последующие фазы. При постоянном добавлении питательных веществ и одновременном удалении продуктов обмена можно добиться длительного пребывания клеток популяции в логарифмической фазе. Наиболее часто для этой цели применяют хемостат (см.).
Несмотря на постоянную скорость роста популяции бактерий в логарифмической фазе, отдельные клетки все же находятся в разных стадиях деления. Иногда важно синхронизировать рост всех клеток популяции, то есть получить синхронную культуру. Простыми методами синхронизации является изменение температурных условий или культивирование в условиях недостатка питательных веществ. Вначале культуру помещают в неоптимальные условия, затем сменяют их оптимальными. При этом у всех клеток популяции синхронизируется цикл деления, но синхронное деление клеток происходит обычно не более 3-4 циклов.
Ранее неоднократно выдвигались гипотезы, согласно которым превращение одних форм бактерий в другие в цикле развития идет по замкнутому кругу. Все эти гипотезы объединяются общим термином «циклогения». Теоретические представления о циклогении имеют в настоящее время лишь исторический интерес. Однако фактические данные о процессах диссоциации бактерий (см.) не потеряли своего значения.
Жизнеспособность бактерий при действии внешних факторов изучают разными методами, напр, путем подсчета выживших клеток. Для этого строят кривые выживаемости, выражающие зависимость числа выживших клеток от времени воздействия.
Бактерии относительно устойчивы к низким температурам. Бактерии более чувствительны к действию высоких температур. Обычно при прогревании бактерий при t° 60-70° происходит гибель вегетативных клеток, споры при этом не погибают. Чувствительность бактерий к высоким температурам используется при стерилизации (см.).
Разные виды бактерий относятся по-разному к высушиванию. Одни бактерии (например, гонококки) очень быстро погибают, другие (микобактерии) весьма устойчивы. Однако соблюдая определенные условия (наличие вакуума, специальных сред), можно получить высушенные лиофилизированные культуры бактерий, длительное время сохраняющие жизнеспособность (см. Лиофилизация).
Бактерии можно разрушить путем механического растирания с различными порошками (стеклянный, кварцевый), а также воздействием ультразвука.
Бактерии чувствительны к ультрафиолетовым лучам; наиболее эффективны лучи с длиной волны около 260 нм, что соответствует максимуму поглощения их нуклеиновыми кислотами. Ультрафиолетовые лучи обладают мутагенным действием. Рентгеновские лучи также обладают летальным и мутагенным действием (см. Мутагены).
Чувствительность к химиотерапевтическим препаратам и антибиотикам зависит от вида бактерий и механизма действия препарата на клетку. Из чувствительных бактерий могут быть получены устойчивые формы в результате мутации или при передаче факторов множественной лекарственной устойчивости микроорганизмов (см.).
Патогенность и вирулентность. Бактерии обитают в почве, воде, организме человека и животных. Разнообразные группы бактерий могут развиваться в условиях, не доступных для других организмов. Качественный и количественный состав бактерий, обитающих во внешней среде, зависит от многих условий: pH среды, температуры, наличия питательных веществ, влажности, аэрации, присутствия других микроорганизмов (см. Антагонизм микробов) и др. Чем больше в среде содержится разнообразных органических соединений, тем большее количество бактерий можно в ней обнаружить. В незагрязненных почвах и водах встречается сравнительно небольшое количество сапрофитных форм бактерий. В почве обитают спорообразующие и неспорообразующие бактерии, микобактерии, миксобактерии, кокковые формы. В воде встречаются разнообразные спорообразующие и неспорообразующие бактерии и специфические водные бактерии - водные вибрионы, нитчатые бактерии и др. В иле на дне водоемов обитают различные анаэробные бактерии. Среди бактерий, обитающих в воде и почве, имеются азотфиксирующие, нитрифицирующие, денитрифицирующие, расщепляющие целлюлозу бактерии. и др. В морях и океанах обитают бактерии, растущие при высоких концентрациях солей и повышенном давлении, встречаются светящиеся виды. В загрязненных водах и почве, кроме почвенных и водных сапрофитов, в большом количестве встречаются бактерии, обитающие в организме человека и животных,- энтеробактерии, клостридии и др.
Показателем фекального загрязнения обычно является наличие кишечной палочки. В связи с широким распространением бактерий и своеобразием метаболической активности многих их видов они имеют исключительно большое значение в круговороте веществ в природе. В круговороте азота участвуют многие виды бактерий - от видов, расщепляющих белковые продукты растительного и животного происхождения, до видов, образующих нитраты, которые усваиваются высшими растениями. Метаболическая активность бактерий обусловливает минерализацию органического углерода и образование углекислоты, возврат которой в атмосферу важен для поддержания жизни на Земле. Усвоение углекислоты из атмосферы производится зелеными растениями благодаря их фотосинтетической активности. Большая роль принадлежит бактериям в круговороте серы, фосфора, железа.
Сравнительно небольшая часть всех известных микробов способна вызывать заболевания человека и животных. Потенциальная способность бактерий вызывать инфекционные заболевания, являющаяся их видовым признаком, называется болезнетворностью или патогенностью. У одного и того же вида степень выраженности патогенных свойств может довольно широко варьировать. Степень патогенности штамма определенного вида бактерий называется его вирулентностью (см.). Среди бактерий имеются условно патогенные виды, болезнетворность которых зависит от состояния макроорганизма, внешней среды и др.
Генетика бактерий - раздел общей генетики, изучающий наследственность и изменчивость у бактерий. Относительная простота организации бактерий, их способность расти в синтетических средах, быстрое размножение позволяют анализировать относительно редко возникающие изменения генома (см.) бактерий, составляющих многомиллиардные популяции, и проследить за их наследованием. Для этого используются специальные методы, обеспечивающие отбор из огромной популяции отдельных генетически измененных бактериальных клеток, передачу хромосомы или ее фрагментов от одних клеток (доноров) другим (реципиентам) с последующим генетическим анализом возникших рекомбинантов (см. Рекомбинация). Методы генетического анализа (см.) бактерий позволили изучить не только организацию бактериальной хромосомы, но и расшифровать тонкую структуру гена, а также установить функциональные взаимоотношения генетических единиц, составляющих отдельные бактериальные опероны (см.).
Развитие генетики бактерий связано с изучением бактериальной трансформации (см.), которое дало возможность установить роль ДНК как материальной основы наследственности. При изучении генетической трансформации у бактерий были разработаны методы экстракции и очистки ДНК, биохимические и биофизические методы анализа ее свойств. Это позволило не только изучать генетические изменения на клеточном уровне, но и сопоставлять эти изменения с изменением структуры ДНК. Таким образом, в совокупности с генетическими методами методы биохимического исследования генетического материала обеспечили возможность анализа закономерностей бактериальной генетики на молекулярном уровне.
Среди бактерий наиболее изученными в генетическом отношении являются кишечные палочки, у которых были открыты способы передачи генетического материала (хромосомы или ее фрагментов) от донора реципиенту, осуществляемые либо путем прямого скрещивания (см. Конъюгация у бактерий), либо с помощью бактериальных вирусов (см. Трансдукция). Другими микроорганизмами, обладающими такими же видами обмена генетическим материалом и по генетической характеристике приближающимися к кишечным палочкам, являются сальмонеллы.
Закономерности генетического обмена, установленные на кишечных палочках и сальмонеллах, присущи и ряду других микроорганизмов, играющих важную роль в инфекционной патологии. Феномены конъюгации и трансдукции обнаружены также у шигелл и некоторых других патогенных микроорганизмов, что позволяет осуществить генетический анализ факторов, обусловливающих их патогенность.
Для выяснения молекулярных механизмов, различных генетических феноменов значительный интерес представляют микроорганизмы, способные к генетической трансформации, при которой бактерии-реципиенты поглощают очищенную ДНК, экстрагированную из бактерий-доноров. В опытах трансформации выявляется генетическая активность изолированной, внеклеточной ДНК, что позволяет анализировать функциональную активность ДНК, подвергнутой различным воздействиям, изменяющим ее структуру как in vivo, так и in vitro.
Поэтому в молекулярно-генетических исследованиях широко используются трансформируемые виды бактерий, такие как Вас. subtilis, H. influenzae, Pneumococcus и др.
Свойства бактерий, как и любых других организмов, определяются набором присущих им генов. Запись генетической информации, закодированной в бактериальных генах, осуществлена на основе универсального триплетного кода (см. Генетический код). Яновским (С. Janofsky) были получены доказательства колинеарности (соответствия) между последовательностью нуклеотидов и последовательностью аминокислот в полипептиде и установлен in vivo состав отдельных триплетов, кодирующих включение различных аминокислот.
Набор генов, присущих бактериям, определяет их генотип (см.).Бактерии, обладающие одним и тем же генотипом, не всегда идентичны по своим свойствам; их свойства могут варьировать в зависимости от среды культивирования, возраста бактериальных культур, температуры выращивания и ряда других факторов внешней среды. Генотип определяет только потенциально присущие бактериальным клеткам свойства, выражение которых зависит от функционирования (активности) конкретных генетических структур. Хромосома бактерий включает 2 типа функционально различных генетических структур: структурные гены, детерминирующие специфичность белков, которые данная клетка способна синтезировать, и регуляторные гены, регулирующие активность структурных генов в зависимости от окружающих условий, в частности от наличия или отсутствия субстрата синтезируемого фермента либо от концентрации необходимого клетке соединения, от состояния генетического материала (репликация ДНК) и пр.
В активном состоянии структурные гены транскрибируются (см. Транскрипция), то есть становятся доступными для считывания генетической информации с помощью ДНК-зависимой РНК-полимеразы. Формирующаяся в процессе транскрипции информационная РНК (и-РНК) транслируется в соответствующий полипептид, структура которого закодирована в данных структурных генах.
По типу регуляции синтетические системы бактерий делят на 2 вида: катаболические и анаболические. Первые осуществляют утилизацию необходимой клетке энергии, вторые обеспечивают биосинтез соединений, необходимых бактериям.
Катаболическая система E. coli, осуществляющая расщепление лактозы на глюкозу и галактозу, детально изучена Жакобом и Моно (F. Jacob, J. Monod).
Ферменты этой системы (β-галактозидаза, галактозидпермеаза и галактозидтрансацетилаза) детерминируются соответствующими структурными генами. Рядом со структурными генами расположен регуляторный участок, так называемый оператор, «включающий» и «выключающий» считывание информации (транскрипцию) со структурных генов.
Другой регуляторной единицей данной системы является ген, контролирующий синтез репрессора - белка, способного соединяться с оператором. В присутствии репрессора структурные гены не транскрибируются РНК-полимеразой и синтеза соответствующих ферментов не происходит. Между оператором и геном-регулятором находится короткий участок ДНК - промотор - место посадки РНК-полимеразы. Добавленная к среде культивирования бактерий лактоза связывает репрессор, оператор оказывается свободным, и структурные гены начинают транскрибироваться, в результате чего происходит синтез ферментов. Таким образом, лактоза, являющаяся субстратом действия ферментов, выполняет функцию индуктора их синтеза.
Подобного рода регуляция свойственна и другим катаболическим системам. Синтез ферментов, индуцируемый субстратами их действия, называют индуцибельным.
Иного рода регуляция присуща анаболическим бактериальным системам. У этих систем ген-регулятор контролирует синтез неактивного репрессора-апорепрессора. При малых количествах конечного метаболита, контролируемого структурными генами данного биохимического пути (например, какой-нибудь аминокислоты), апорепрессор не соединяется с геном-оператором и не препятствует, следовательно, работе структурных генов и синтезу данной аминокислоты. В случае же избыточного образования конечного продукта последний начинает функционировать как корепрессор. Связываясь с апорепрессором, корепрессор превращает его в активный репрессор, соединяющийся с геном-оператором. В результате транскрибирование структурных генов и синтез соответствующих соединений прекращаются, то есть наблюдается репрессия системы. В процессе расхода клеткой избыточного конечного метаболита активный репрессор вновь превращается в апорепрессор, ген-оператор освобождается и структурные гены вновь приобретают активность, то есть происходит дерепрессия системы.
Таким образом, генетическим системам обоего рода - катаболическим (индуцибельным) и анаболическим (репрессибельным) - свойственна регуляция по типу обратной связи: накопление и расход конечного продукта регулирует его синтез анаболическими системами; в катаболических системах в роли регулятора выступает субстрат действия синтезируемых ферментов.
Сдвиги в ходе клеточных синтетических процессов, вследствие которых могут возникать ненаследуемые изменения свойств бактерий одного и того же генотипа, могут быть выражены в различной степени в зависимости от окружающих условий. Резко нарушенные условия существования могут приводить к выключению функции отдельных структурных генов или их гиперфункции, что в свою очередь может привести к значительным морфологическим изменениям, несбалансированному росту и, в конечном счете, к гибели клеток.
Комплекс свойств бактерий, выявляемых в данных условиях существования, называют фенотипом. Фенотип бактерий хотя и зависит от окружающей среды, но контролируется генотипом, так как характер и степень возможных для данной клетки фенотипических изменений определяется набором генов, то есть генотипом.
Как структурные, так и регуляторные гены бактерии локализуются в бактериальной хромосоме и в сумме образуют генетический аппарат бактерий. Помимо этого, бактерии могут нести внехромосомные генетические детерминанты - плазмиды (см.), которые, как правило, не являются жизненно необходимыми для клетки. Напротив, активация функций некоторых из них (например, бактериоцинов) губительна для бактериальных клеток, не несущих плазмид. Вместе с тем плазмидные элементы придают бактериям ряд свойств, представляющх большой интерес, с точки зрения инфекционной патологии. Так плазмидными детерминантами может быть обусловлена множественная устойчивость к лекарственным веществам (см. R-фактор), выработка альфа-гемолизина и других бактериальных токсинов.
Хромосома бактерий, как и клеток высших организмов, локализована в ядре.
В отличие от клеток высших организмов, бактериальное ядро лишено оболочки и именуется нуклеоидом. Количество нуклеоидов в бактериальных клетках варьирует в зависимости от фазы роста культуры: число нуклеоидов у кишечных палочек максимально в быстро размножающихся культурах, находящихся в логарифмической фазе роста. В стационарной фазе роста кишечные палочки содержат по одному нуклеоиду. Хромосома бактерий представляет собой молекулу ДНК, замкнутую в кольцо, с молекулярным весом порядка 1,5 - 2 X 109 дальтон.
Рис. 13. Схема последовательности передачи генетического материала при конъюгации E. coli, иллюстрирующая кольцевую структуру бактериальной хромосомы. Буквами обозначены различные гены. Правая стрелка - последовательность передачи генов (В,Г,Д,Е,А,Б) реципиенту донорным штаммом 1; левая стрелка - последовательность передачи генов (Д,Г, В,Б,А,Е) реципиенту донорным штаммом 2.
Кольцевое строение бактериальной хромосомы установлено тремя методами: ауторадиографическим, электронномикроскопическим и генетическим. В первом случае получены ауторадиограммы кольцевых структур бактериальной ДНК, во втором - электронномикроскопические изображения изолированной кольцевой ДНК, в третьем - установлены закономерности генетического обмена, объяснимые только кольцевым строением хромосомы. Это можно пояснить следующим условным примером. Допустим, что в процессе скрещивания бактерий (конъюгации) от одной бактерии к другой передаются гены, обозначенные буквами А, Б, В, Г, Д, Е. Один из использованных донорных штаммов Hfr (сокращение от английского выражения high frequency of recombination - высокая частота рекомбинации) имеет точку начала передачи хромосомы в области гена В. В этом случае наблюдается следующий порядок передачи генов: В, Г, Д, Е, А, Б. Второй штамм Hfr начинает передачу хромосомы с гена Д и передает ее в направлении, противоположном предыдущему. Гены в этом случае передаются в следующем порядке: Д, Г, В, Б, А, Е. Экспериментально показанное сохранение последовательности передачи генов при измененном порядке их переноса легко объясняется кольцевым строением хромосомы (рис. 13).
Методы, дающие возможность экспериментально осуществлять перенос генетического материала у бактерий (конъюгация, трансдукция и трансформация), позволили построить генетическую карту бактериальной хромосомы, отражающую относительную локализацию генов. С целью генетического картирования широко используется конъюгация, при которой реципиенту передаются большие участки бактериальной хромосомы, а иногда и вся хромосома донора. При конъюгационном картировании применяют различные подходы: устанавливают передачу отдельных генов по времени, выявляют сцепленную передачу генов, устанавливают частоту передачи генов, не подвергаемых селекции (неселективных), расположенных проксимально и дистально относительно селекционируемого гена, и т. п. Конъюгация, однако, в большинстве случаев не обеспечивает возможности достаточно точного картирования, так как при этом рекомбинация (см.) осуществляется на относительно протяженных участках хромосомы. Точное картирование производят с помощью трансдукции, при которой передаются более короткие фрагменты хромосомы бактерии, не превышающие 0,01 ее длины. Один из основных приемов трансдукционного картирования состоит в определении возможности котрансдукции (то есть совместной передачи) картируемого гена и гена, локализация которого в хромосоме известна. Наличие котрансдукции свидетельствует о близком (сцепленном) расположении анализируемых генов. С помощью трансдукции можно также устанавливать порядок расположения генов. Для этой цели используют специальный метод генетического анализа - так называемый тест трех точек, при котором анализ скрещиваний ведется относительно трех генов.
Трансформация для картирования используется сравнительно редко. Обработка реципиентных бактерий трансформирующей ДНК дает возможность передавать только очень небольшие участки бактериальной хромосомы. Вследствие этого с помощью трансформации можно анализировать лишь гены, которые составляют группы сцеплений.
Генетическая карта E. coli К-12, построенная на основе многолетних генетических исследований, проведенных в различных лабораториях мира, насчитывает в настоящее время несколько сот локализованных генов.
Рис. 14. Циркулярная генетическая карта, показывающая расположение генов в хромосоме E. coli. Гены обозначены символами, расшифрованными в табл. 3. Цифры на внутренних поверхностях окружностей обозначают единицы длины карты (время, в течение которого данный ген передается при конъюгации), выраженные в минутах (от 0 до 90 мин.).
На рис. 14 представлена генетическая карта E. coli, опубликованная в 1970 году Тейлором (A. L. Taylor) в журнале «Bacteriological Reviews» (США). Для удобства ориентации окружность генетической карты, схематически изображающая хромосому, разделена на отрезки - минуты, в сумме составляющие время, необходимое для передачи в процессе конъюгации всей хромосомы. Для кишечных палочек это время составляет около 90 минут. Размещенные по окружности символы обозначают соответствующие гены и расшифрованы в таблице 3, которая включает около 2000 бактериальных генов, функции которых в жизнедеятельности бактериальной клетки в значительной мере исследованы. Сведения о локализации генов на хромосоме бактерий позволяют решать конкретные задачи практической микробиологии. Они служат необходимой предпосылкой для изучения вирулентности и патогенности бактерий, их устойчивости к лекарственным препаратам, возможности создания аттенуированных штаммов и для других целей. В расположении генов кишечной палочки и сальмонелл существует выраженная гомология.
В ряде случаев гены (цистроны), контролирующие отдельные стадии синтеза конечного метаболита, расположены в одном участке бактериальной хромосомы. Последовательность расположения генов при этом соответствует последовательности использования детерминируемых ими промежуточных соединений в ходе синтеза конечного метаболита. В том же участке хромосомы, где расположены структурные гены, могут располагаться и регуляторные генетические единицы, составляющие в совокупности с соответствующими структурными генами оперон (см.). Примером таких оперонов являются группы генов, обеспечивающих синтез гистидина, триптофана и т. д.
В других случаях структурные и регуляторные гены одного и того же биохимического пути размещаются в различных областях бактериальной хромосомы, примером чего могут служить гены, контролирующие синтез метионина, расщепление арабинозы, синтеза пуринов и др.
Изучение генетического обмена у бактерий не ограничивается целью генетического картирования. Возможность такого обмена используется и при получении полезных для человека новых штаммов бактерий. В частности, рекомбинация между патогенными и непатогенными бактериями может быть использована для конструирования аттенуированных штаммов, то есть штаммов с ослабленной вирулентностью, пригодных для изготовления живых вакцин. Такие штаммы могут быть получены из патогенных бактерий (например, из дизентерийных бактерий) при замещении генетической области (или областей), определяющей их патогенность, соответствующими участками хромосомы непатогенных бактерий (например, кишечных палочек). Для создания аттенуированных штаммов необходимо не только обеспечить возможность генетического обмена, но и предварительно изучить генетические основы патогенности, вирулентности, иммуногенности и картировать определяющие их гены. Только при этом условии может быть осуществлено конструирование полноценных вакцинных штаммов, утративших только вирулентность, но сохранивших свойства, обеспечивающие иммуногенность.
Генетический обмен у бактерий осуществляется и в естественных условиях их обитания, следствием чего является рекомбинационная изменчивость бактерий, проявляющаяся в образовании атипичных форм. Это обстоятельство придает изучению рекомбинационного процесса практический интерес, так как механизм образования, патогенетическое и диагностическое значение атипичных форм - актуальнейшие вопросы инфекционной патологии.
Помимо фенотипической и рекомбинационной изменчивости, бактериям свойственна мутационная изменчивость, то есть изменчивость, обусловленная мутациями, представляющими собой структурные перестройки генов, полную или частичную их утрату (делеций), не связанные с рекомбинациями. Бактерии широко используются для изучения закономерностей мутационного процесса. Мутация (см.), то есть изменение генотипа,- явление, вызываемое действием мутагенных агентов. Они являются основой для проведения всех генетических исследований, так как изучение функции генов, их картирование и другие генетические задачи могут быть решены только с помощью соответствующих мутантов. Характер бактериальных мутантов, формирующихся под влиянием мутагенных агентов, не зависит от механизма действия мутагенов (см.). Создавшееся же на первом этапе развития бактериальной генетики представление об адекватности мутационной изменчивости бактерий используемым мутагенам, то есть о специфическом действии последних, оказалось ошибочным, так же как ошибочной оказалась концепция о спонтанном характере мутационного процесса. Указанное представление исходило из того, что при действии агентов, вызывающих гибель основной части бактериальной популяции, исследователи получали мутации, соответствующие примененному агенту. Так, например, действие сульфаниламидов сопровождалось выделением сульфамидорезистентных мутантов, действие фагов - выделением фагорезистентных мутантов и т. д. Работами Лурия (S. Luria), Дельбрюка (М. Delbruck), Ледерберга (J. Lederberg) и Ньюкомба (H. Newcombe) было показано, что формирование таких мутантов происходит до добавления губительно действующего агента, а последний играет лишь роль селекционирующего фактора. Мутационные изменения в бактериальных популяциях возникают во многих генах, но селекционирующие агенты отбирают лишь соответственные мутации. Так, например, в мутирующей популяции бактерий могут содержаться мутанты различного рода: ауксотрофы - неспособные синтезировать какие-либо необходимые клетке соединения; мутанты, утратившие или приобретшие способность ферментации отдельных углеводов; резистентные к антибиотикам и т. д. При высеве такой популяции на среду с антибиотиком немутировавшие особи, так же как особи, несущие мутации, не имеющие отношения к антибиотикоустойчивости, не дадут роста. Вырастут на такой среде только бактерии, имеющие мутации в гене, определяющем соответствующую резистентность. Это, однако, не означает, что происхождение антибиотикоустойчивых мутантов связано с воздействием селекционирующего агента. Причиной возникновения резистентных мутантов, как и мутантов, оставшихся невыявленными на среде с антибиотиком, являются мутационные события, совершившиеся до воздействия селекционирующего агента. В свою очередь это не означает, что селекционирующий агент не может обладать мутагенной активностью, но при наличии таковой он индуцирует мутации не только в генах, соответствующих механизму его действия, но и, как любой другой мутаген, в самых разнообразных генах, а селекционирует лишь соответственно измененные бактерии.
Несостоятельность концепции о спонтанном мутировании бактерий была опровергнута на том основании, что при испытании многочисленных химических соединений и физических агентов, возможно, действующих на обычно культивируемые популяции бакткрий, было установлено, что мутагенная активность свойственна чрезвычайно широкому кругу факторов, в том числе естественным метаболитам бактерий. Действие этих факторов не всегда поддается контролю, но объясняет причину возникновения так называемых спонтанных мутаций.
Согласно современной концепции, спонтанные мутации представляют собой явление того же порядка, что и экспериментально полученные мутации, именуемые индуцированными. Как те, так и другие, причинно обусловлены. Различия состоят лишь в том, что индуцируемые мутации возникают под влиянием специально примененных мутагенных агентов, агенты же, вызывающие спонтанные мутации, остаются невыясненными. Термин «спонтанные», таким образом, не отражает суть явления и применяется условно для обозначения мутаций, возникающих без специальных воздействий.
Мутации, обусловленные воздействием мутагенных агентов, возникают в результате изменения последовательности нуклеотидов ДНК, проявлением чего является утрата или изменение функции полипептида, кодируемого данным геном, или изменение свойств регуляторных единиц бактериального генома (оператор, промотор). По «протяженности» различают генные и хромосомные мутации. Первые затрагивают один ген, вторые распространяются более чем на один ген. Хромосомные мутации возникают в результате выпадения большого числа нуклеотидов (делеций). Генные мутации чаще являются точечными, то есть заключаются в замене, вставке или выпадении одной пары нуклеотидов ДНК. Различают простые и сложные замены азотистых оснований в ДНК - транзиции и трансверзии (см. Мутация).
Бактериям свойственны прямые и обратные мутации. Последние часто имеют супрессорный характер. Мутагенные действия на бактериальные клетки оказывают все известные мутагены. Наиболее часто применяемыми мутагенами в бактериологических генетических исследованиях являются ультрафиолетовые лучи, проникающая радиация, моно- и бифункциональные алкилирующие агенты, аналоги оснований и ряд других.
Исследования последних лет, осуществленные на бактериях, вскрыли наличие генетически детерминированных систем, обеспечивающих репарацию повреждений генетического материала (ДНК). Этими исследованиями начато новое направление в генетике и молекулярной биологии. Данные, полученные при изучении бактериальной репаративной активности, привели к пересмотру ряда представлений о механизмах действия мутагенных агентов, формировании, фиксации и фенотипическом выражении мутационных изменений.
Антигены бактерий локализованы в жгутиках, капсуле, клеточной стенке, мембранах и других структурах клетки. Антигены бактерий- биологически активные компоненты клетки, определяющие ее иммуногенные, токсические и инвазивные свойства. Расшифровка химической структуры бактериальных антигенов, контроля их синтеза клеткой и локализации в ней, а также иммуногенной специфичности является теоретической основой для создания эффективных методов диагностики и специфической иммунопрофилактики бактериальных инфекций.
Распределение антигенов в бактериальной клетке изучают иммуноцитологическими методами - специфической капсульной реакцией по Томчику (J. Tomcsik), прямым и непрямым методом флюоресцирующих антител, способом антител, меченных ферритином, йодом, ртутью или ураном, с применением электронной микроскопии ультратонких срезов, а также с помощью выделения отдельных структур для их последующего иммунологического изучения. Для выделения антигенов из бактерий применяют механическое разрушение при помощи мелких стеклянных шариков, ультразвук, высокое давление, детергенты, лизоцим или бактериофаг. Растворимые антигенные комплексы извлекают из бактерий путем их обработки протеолитическими ферментами, горячей водой, трихлоруксусной кислотой, диэтил гликолем, фенолом, мочевиной, пиридином, этиловым эфиром и др. Растворимые антигены очищают градиентным ультра-центрифугированием с помощью колоночной хроматографии или препаративным электрофорезом. Высокоочищенные антигены получают из энтеробактерий, коклюшных микробов, стрептококков и др.
Среди антигенов бактерий различают типо-, видо-, группо- и родоспецифические, а также «неспецифические». Большинство типо- и группоспецифических антигенов локализовано в жгутиках, капсуле и клеточной стенке бактерий. Антигены мембран и внутриклеточных структур бактериальных клеток изучены недостаточно.
Жгутиковые антигены (Н-антигены) представляют собой белок (флагеллин) с молекулярным весом 20 000- 40 000, состоящий из альфа- и бета-полипептидных цепей. При аналитическом ультрацентрифугировании флагеллин образует один гомогенный пик с коэффициентом седиментации 1,5-1,68. При нагревании до t° 100° в сильно кислой или щелочной среде жгутиковые антигены инактивируются. Предполагают, что аминокислотный состав разных серотипов жгутиковых антигенов сальмонелл, эшерихий и других энтеробактерий различен и это определяет их типовую специфичность. На различии в специфичности жгутиковых антигенов построена классификация серотипов сальмонелл. Изолированные жгутики энтеробактерий, холерного вибриона и других бактерий реагируют как Н-антиген (см. Жгутики бактериальные), однако фракция жгутиков содержит всегда примесь О-антигена. Жгутики и флагеллин S- и R-форм Proteus mirabilis содержат общий и различающийся антигенные компоненты. Антигенная специфичность зависит от соединения и последовательности субъединиц флагеллина жгутиковой нити. Методом иммунодиффузии (см.) у Н-антигена выявляются два компонента. При помощи препаративных иммунохимических методов можно получить Н-антиген, очищенный от О-антигена. Очищенный Н-антиген не обладает протективной активностью в опытах на лабораторных животных. Растворимые жгутиковые антигены используют для приготовления эритроцитарных Н-диагностикумов.
Капсульные антигены (К-антигены) многих бактерий типоспецифичны и стимулируют специфический иммунитет (см.). Многие из капсульных антигенов являются полисахаридами или мукопептидами.
Капсульные антигены пневмококков - типоспецифические полисахариды, в изолированном виде обладают свойствами гаптенов (см. Гаптены) и обозначаются как растворимая специфическая субстанция (SSS). В капсуле возбудителя сибирской язвы имеются гаптен-пептид, а также антигены белково-полисахаридной природы, чувствительные к протеолитическим ферментам. Капсульный глутамиловый полипептид, обнаруженный у Вас. megaterium, обладает свойствами антигена, перекрестно реагируя с антигенами клеточной стенки этого же микроба. Капсульные антигены полисахаридной природы выявлены у микробов рода Acetobacter. Эти антигены перекрестно реагировали с антисыворотками к стрептококкам группы В и G, а также к пневмококкам 23-го типа. Перекрестная серол, реакция обусловлена наличием в антигенах общей детерминантной группы - L-рамнозы.
Установлены перекрестные реакции между капсульными полисахаридными антигенами менингококков группы А и Вас. pumilus, менингококками группы С и E. coli 016: NM, пневмококками типа III и E. coli К7 и др.
В капсуле (точнее микрокапсуле) энтеробактерий обнаружены полисахаридные антигены: Vi-антиген (см.) у S. typhi, S. paratyphi С, E. coli, E. ballerup, В(К)-антигены у эшерихий, К-антигены у клебсиелл. У нек-рых сальмонелл обнаружены капсульные антигены белковой природы, которые обладают протективными свойствами (S. typhimurium, S. adelaide, Citrobacter). Капсульные полисахаридные антигены К. pneumoniae обладают адъювантным эффектом (см. Адъюванты).
В клеточной стенке многих видов микробов выявлены типо-, группо-, видо- и родоспецифические антигены. Согласно схеме Краузе (R. М. Krause, 1963) клеточная стенка стрептококка содержит типоспецифические белковые антигены (М-субстанция) и группоспецифические антигены полисахаридной природы. М-антиген (насчитывается до 60 типов) является протективным антигеном; в частично очищенном виде предложен в качестве вакцины. Проведенная амер. учеными проверка вакцины, состоящей из частично очищенного М-антигена, показала, что препарат вызывал у части привитых детей ревматизм. По данным ряда авторов, М-антиген тесно связан с антигеном, перекрестно реагирующим с антигеном сердечной мышцы человека. Предполагают, что перекрестно реагирующий антиген и М-антиген являются разными детерминантами одной белковой молекулы. Обнаружено также, что между M-антигеном стрептококка первого типа группы А и системой HLA лимфоцитов человека имеется связь. Другим группоспецифическим антигеном клеточной стенки стрептококков является мукопептидный антиген, специфичность которого обусловлена N-ацетилглюко-замином (для стрептококков группы А) и N-ацетилгалактозамином (для стрептококков группы С). Группоспецифическим антигеном молочнокислых стрептококков является внутриклеточная тейхоевая кислота.
В клеточной стенке стафилококков сосредоточены видоспецифические антигены - белковый А-антиген в поверхностном слое стенки и тейхоевая кислота, которая в комплексе с мукопептидом составляет внутренний слой стенки. А-антиген - преципитиноген, обнаруженный у большинства штаммов Staphylococcus aureus, его мол. вес 13 200. Он обладает способностью вступать в неспецифическую реакцию с Fc-фрагментом иммуноглобулинов класса G сыворотки крови человека и некоторых животных. Тейхоевая кислота - специфический преципитиноген, состоящий из субъединиц полирибитолфосфата, к которому присоединены N-ацетил глюкоз амин (детерминантная группа) и D-аланин. Тейхоевая кислота обнаружена в клеточных стенках стрептококков, стафилококков, микрококков Вас. subtilis и молочнокислых бактерий. Установлено, что тейхоевая кислота, изолированная из стафилококков, обладает протективными свойствами. Из клеточных стенок Cl. botulinum типа А изолирован и очищен белковый термостабильный антиген, устойчивый к действию трипсина.
В клеточных стенках коринебактерий, нокардий, микобактерий и актиномицетов обнаружены видо- и родоспецифические антигены. В состав мукопептида клеточной стенки коринебактерий, нокардий и микобактерий входит арабиноза и галактоза, которые обусловливают перекрестную серологическую реактивность между штаммами этих групп. В клеточной стенке дифтерийного микроба выявлены два антигена: поверхностный типоспецифический белок и более глубоко расположенный группоспецифический термостабильный полисахарид. Сложный набор антигенов выявлен в клеточной стенке анаэробных коринебактерий методом радиоиммуноэлектрофореза. Главным компонентом клеточных стенок этих микробов оказался кислый полисахарид. Группоспецифические мукополисахаридные гаптены выявлены в клеточных стенках Вас. anthracis. Эти гаптены реагируют в реакции преципитации с аналогичными антигенами, изолированными из Вас. cereus. Типоспецифические антигены Вас. megaterium также локализованы в клеточной стенке.
О - антиген (эндотоксин) энтеробактерий локализован в промежуточном слое клеточной стенки и представляет собой комплексное соединение, состоящее из белка или пептида, полисахарида и липида. Липополисахарид (глюцидолипоидный комплекс), извлеченный смесью фенола с водой, имеет молекулярный вес 106-107, на 60-70% состоит из фосфорилированного полисахарида и на 20-40% - из липида (липид А жирных кислот). Молекулярный вес очищенного полисахарида равен 20 000-60 000. Полисахарид О-антигенов разных видов энтеробактерий построен по одному принципу и состоит из базисной структуры и боковых S-специфических цепей, являющихся детерминантными группами. Базисная структура (иначе R-липополисахарид) всех серотипов сальмонелл включает глюкозамин, 2-кето-З-дезоксиоктанат (КДО), L-глицеро-D-манно-гептозу, галактозу и глюкозу.
Известно 6 хемотипов R-липополисахаридов, выявленных у соответствующих R-мутантов (Ra, Rb, Rc, Rd1, Rd2 и Re), которые различаются по степени дефектности в химической структуре. В состав белковых цепей входят 6-дезокси- и особенно 3,6-дидезоксигексозы. S-специфические боковые цепи построены из повторяющихся олигосахаридов. O-факторы представляют собой часть или всю детерминантную группу О-антигена. Они классифицируются по схеме Кауферманна- Уайта с помощью перекрестных или гомологичных реакций агглютинации. Концевой сахар, обладающий наибольшим сродством с активным центром антитела, обозначают как иммунодоминантный сахар. О-фактор 2 (группа А) детерминируется иммунодоминантным сахаром паратозой, О-фактор 4 (группа В) - абеквозой, О-фактор 9 (группа D) - тивелозой и т. д. Иммунодоминантным сахаром Shigella dysenteriae является рамноза. Специфичность О-антигенного комплекса обеспечивается не только иммунодоминантным сахаром, но и последовательностью расположения сахаров в боковой цепи и характером хим. связей между отдельными сахарами. Первоначально в микробной клетке синтезируется базисная структура полисахарида, а затем боковые цепи. Липидная часть О-антигена (липид А) у всех энтеробактерий почти идентична. Липид А представляет собой длинную цепь жирных кислот, производных полифосфо-d-глюкозамина, он прочно связан с O-специфическим полисахаридом. При этом биосинтез молекулы полисахарида, а также всей молекулы О-антигена генетически детерминирован.
Изолированный О-антиген (липополисахарид) имеет ветвистую структуру, которая нарушается при обработке комплекса дезоксихолатом натрия; образуются так называемые гаптенные субъединицы, из которых, по-видимому, построен весь комплекс. Изолированные О-антигены токсичны, пирогенны, вызывают местный и общий феномен Швартцмана (см. Швартцмана феномен), некроз опухолевидной ткани, специфическую и неспецифическую резистентность, а также обладают иммуностимулирующей и иммунодепрессивной активностью. Предполагают, что токсическая активность О-антигенов обусловлена липидом А. Введение О-антигена животным сопровождается лейкопенией и тромбоцитопенией. О-антиген вызывает феномен толерантности, сопровождающийся заметным увеличением фагоцитарной активности. Помимо О-антигена, в клеточных стенках энтеробактерий обнаружены лабильные к нагреванию антигены, а также общие антигены.
В 1962 г. Кунин (С. Kunin) с соавторами впервые описали общий антиген энтеробактерий, который по специфичности отличается от О-антигена. Общий антиген, извлеченный из E. coli 014,- полисахарид, вызывает у кроликов продукцию специфических антител.
Липополисахарид, или липид А, вводимый животному вместе с общим антигеном, подавляет продукцию антител к общему антигену. Другой вид общего антигена, названный Горжинским и Бродхаге (О. О. Gorzynski, 1964; О. О. Brodhage, 1961, 1962) С-антигеном, обнаружен у E. coli и Sh. sonnei. У Sh. sonnei при помощи реакции гемагглютинации выявлен бактериальный агглютиноген (ВА), связанный с липополисахаридом. В 1969 году Энгельбрехт (E. Engelbrecht) сообщил еще об одном общем антигене у энтеробактерий - «алкогольфильном» факторе, который был получен из S. paratyphi А и В, S. bareilly. Предполагается, что «алкогольфильный» антиген - полисахарид. В клеточных стенках у холерного вибриона локализован специфический альфа-антиген, у возбудителя коклюша - белковый протективный антиген и гистаминсенсибилизирующий фактор, у чумного микроба - антиген, извлекаемый смесью фенол - вода, и следы фракции I.
Протективная активность изолированных клеточных стенок продемонстрирована в опытах со стафилококками, стрептококками, туляремийных микробом, возбудителем чумы, энтеробактериями, коклюшным микробом, микобактериями, холерным вибрионом, бруцеллами. Из клеточных стенок указанных микробов извлекают растворимые антигены, обладающие протективной активностью. Клеточные стенки многих грамположительных и грамотрицательных микробов вызывают у лабораторных животных образование гранул, дерматиты, гепатиты, хроническик кардиты и артриты. В опытах in vitro клеточные стенки стимулируют выделение лизосомальных энзимов, обладают цитотоксическим эффектом, ингибируют флюцитоз бактерий и рост клеток.
Таким образом, поверхностные структуры многих бактерий содержат типо-, группо-, видо- и родоспецифические антигены, а также общие антигены для разных видов микробов. Многие из перечисленных антигенов имеют важное значение в патогенезе заболеваний и формировании специфического иммунитета.
Антигены мембран и внутриклеточных структур. В мембранах бактерий сосредоточены специфические антигены. Так, антигены цитоплазматической мембраны Вас. megaterium отличаются по своей специфичности от антигенов клеточной стенки.
Изучение антигенного строения мембран Micrococcus lysodeicticus показало, что на поверхности цитоплазматической мембраны расположено 8 антигенов. Во фракции мембран E. coli 0111: К 4: Н12 и других энтеробактерий обнаружены О- и Н-антигены, а также неидентифицированные антигены. Установлено, что 0-антиген мембран идентичен О-антигену клеточных стенок. Н-антиген мембран идентичен Н-антигену изолированных жгутиков, так как базальная часть жгутика прикреплена или расположена на внутренней поверхности цитоплазматической мембраны. Поэтому Н-антигенная активность мембран обусловлена антигенной активностью базальной части жгутика. Белки, извлеченные из мембран микоплазм разных серол, групп, обладали специфической антигенной активностью. Из коклюшного микроба, разрушенного ультразвуком, выделена палочковидная структура с коэффициентом седиментации 22s, которая обладает протективными свойствами (223-антиген). Этот антиген, вероятно, локализован в мембранах. Описан новый класс бактериального антигена - липотейхоевая кислота, которая может быть изолирована из стрептококков, молочнокислых бактерий и некоторых бацилл. Липотейхоевая кислота локализуется на поверхности цитоплазматической мембраны и является группоспецифическим антигеном. Липотейхоевая кислота построена из 25-30 глицерофосфатных остатков и липидного компонента (гликолипида). Часть глицерофосфатных остатков замещена глюкозой и D-аланином. Мембранные антигены большинства патогенных бактерий изучены мало.
Цитоплазматическая фракция бактерий отличается определенным своеобразием: в ней наряду с компонентами цитоплазмы (рибосомы, гранулы, фрагменты эндоплазматического ретикулума, клеточный сок) присутствуют компоненты ядра (ДНК и, возможно, ядерные белки).
Поэтому, подвергая цитоплазматическую фракцию иммунол, анализу, иногда трудно сказать, за счет каких антигенов выявлена активность.
Так называемая суммарная фракция цитоплазмы энтеробактерий, коклюшного микроба, кокков и других бактерий обладает слабой антигенной активностью. В цитоплазме ряда бактерий обнаружены общие антигены: между штаммами рода Nocardia и Streptomyces, Nocardia и Мусоbacterum. Идентичные цитоплазменные антигены выявлены у микобактерий, актиномицетов и коринебактерий. Однако в цитоплазме чумного микроба обнаружены специфические антигены: фракция I, «мышиный» токсин, VW-антиген и антигенный комплекс, извлекаемый трихлоруксусной обработкой. Перечисленные антигены могут иметь важное значение в патогенезе инфекции. На модели чумного микроба показано, что антигенные комплексы, получаемые методом фенол- вода, и антигенный комплекс, извлекаемый трихлоруксусной кислотой, являются разными антигенами и, возможно, локализованы в разных структурах. Из ультразвукового лизата шигелл Зельтман (G. Seltman, 1975) изолировал антиген, двигающийся, к аноду (АТА), который оказался общим для многих энтеробактерий. Этот антиген белковой природы, вероятно, расположен внутри клетки.
Выявлены антигены в рибосомах: в течение 1960-1963 годы было установлено, что в рибосомах бактерий локализованы три типа антигенов, общие для многих бактерий (по-видимому, РНК), общие для ограниченного числа видов (белок) и специфические для каждого вида. В 1967-1975 годы показано, что рибосомальные фракции, полученные из энтеробактерий, листерий, микобактерий, коклюшных микробов, холерных вибрионов, стафилококков, обладают протективными свойствами в опытах на лабораторных животных. При этом доказано, что протективная активность рибосом не связана с примесью антигенов клеточной стенки. Из рибосомальной фракции холерного вибриона методом ионообменной хроматографии изолирован белок, который обладал специфическими протективными свойствами, а очищенные рибосомы не вызывали защиты у животных. Однако одни исследователи предполагают, что протективная активность рибосом связана с РНК, другие - с белком, а третьи считают, что к изолированным рибосомам «прикреплен» какой-то углевод, возможно, клеточной стенки, который обладает специфическими свойствами антигена. Механизм защитного действия «рибосомальных» вакцин не выяснен.
Исследованиями Риби (E. Ribi) с сотр. было продемонстрировано наличие в цитоплазме энтеробактерий низкомолекулярного полисахарида, который по антигенным свойствам и хим. составу близок к О-антигену клеточной стенки. Этот полисахарид описан как плазматический. Его антигенная активность проявляется лишь тогда, когда он соединен с О-антигеном. Однако такой комплекс не вызывает образования антител у кроликов. Плазматический полисахарид был обозначен как нативный гаптен, построенный из «линейных молекул» (частиц), молекулярный вес которых равен 163 000, диаметр - 1,6 нм, длина - 130 нм. Молекулы нативного гаптена, в отличие от О-антигена, не образуют мицеллярных структур. Высказано предположение, что нативный гаптен является предшественником О-антигена клеточной стенки.
Многими исследователями установлено, что бактериальная ДНК обладает антигенными свойствами. Препараты бактериальной ДНК реагируют как антигены с гомологичной и гетерологичными сыворотками. Показана перекрестная серол, реактивность между ДНК бактерий и ДНК клеток макроорганизма.
Некоторые исследователи считают, что ДНК и нуклеопротеиды бактерий стимулируют аутоиммунный процесс.
Таким образом, бактерии имеют сложную мозаику антигенов, которые распределены почти во всех структурах и органелл ах. Одни из этих антигенов более активны, другие - менее. Наиболее важен с практической точки зрения вопрос выявления и выделения протективных антигенов в очищенном виде с целью изготовления эффективных вакцин и диагностических препаратов.
Библиогр.: Анатомия бактерий, пер. с англ., под ред. Г. П. Калины, М., 1960; Иерусалимский Н.Д. Основы физиологии микробов, М., 1963, библиогр.; Метаболизм бактерий, пер. с англ., под ред. В.А.Шорина, М., 1963, библиогр.; Многотомное руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней, под ред. H. Н. Шукова-Вережникова, т. 1, с. 58 и др., М., 1962; Пешков М. А. Цитология бактерий, М.- JI., 1955, библиогр.; он же, Сравнительная цитология сине-зеленых водорослей, бактерий и актиномицетов, М., 1966; Роуз Э. Химическая микробиология, пер. с англ., М., 1971, библиогр.; Станиславский Е. С. Бактериальные структуры и их антигенность, М., 1971, библиогр.; Bergey’s manual of determinative bacteriology, ed. by R. E. Buchanan a. N. E. Gibbons, Baltimore, 1975, bibliogr.; Annual Review of Microbiology, v. 1-26. Stanford, 1957-1972; Bacteria, ed. by I. C. Gunsalus a. R. Y. Stani-er, v. 1-5, N. Y.-L., 1960-1964; Helms tetter C.E. Sequence of bacterial reproduction, Ann. Rev. Microbiol., v. 23, p. 223, 1969, bibliogr.; К a e m p-fer R. a. Meselson M. Studies of ri-bosomal subunit exchange, Cold Spr. Harb. Symp. quant. Biol., v. 34, p. 209, 1969; Korn E.D. Cell membranes, structure and synthesis, Ann. Rev. Biochem., v. 38, p. 263, 1969; N о m u r e M. Bacterial ribosome, Bact. Rev., v. 34, p. 49, 1970; О s-born M. J. Structure and biosynthesis of the bacterial cell wall, Ann. Rev. Biochem., v. 38, p. 501, 1969; Replication of DNA in microorganisms, Cold Spr. Harb. Symp. quant. Biol., v. 33, 1968; R y t e r A. Association of the nucleus and membrane of bacteria, Bact. Rev., v. 32, p. 39, 1969; T о p 1 e у W. W. a. Wilson G. S. Principies of bacteriology and immunity, v. 1 - 2, Baltimore, 1964.
Генетика Б. - Браун В. Генетика бактерий, пер. с англ., М., 1968, библиогр.; Жакоб Ф.иВольман Э. Пол и генетика бактерий, пер. с англ., М., 1962; Захаров И. А. и Квитко К. В. Генетика микроорганизмов, JI., 1967; Сборник методик по генетике микроорганизмов, под ред. Р. Клауса и У. Хейса, пер. с англ., М., 1970, библиогр.; С к а-вронскаяА.Г. Мутации у бактерий, М., 1967, библиогр.; T а у 1 о г А. Z. а. T г о t-t e r C. D. Linkage map of Escherichia coli strain K-12,Bact. Rev., v. 36, p. 504, 1972, bibliogr.; CurtissR. Bacterial conjugation, Ann.Rev. Microbiol.,v. 23, p. 69, 1969; Hartman P. E., Hartman Z.a. Stahl R. Classification and mapping of spontaneous and induced mutations in the histidine operon of Salmonella, Advanc. Genet., v. 16, p. 1, 1971, bibliogr.; Proceedings of the 12-th international congress of genetics, v. 3, Tokyo, 1968; Sanderson Κ. E. Genetics of the Enterobacteriaceae, Advanc. Genet., v. 16, p. 35, 1971, bibliogr.
Антигены бактерий - Адо А. Д. и Федосеева В. Н. Локализация в клетках Neisseria perflava и Klebsiella pneumoniae антигенов, общих (перекрестно реагирующих) с тканями бронхо-легочного аппарата человека, Бюлл. Эксперим, биол, и мед., т. 81, Кя 3, с. 349, 1976; Гольдфарб Д. М. и Замчук Л.А. Иммунология нуклеиновых кислот, М., 1968, библиогр.; М и х а й-л о в И. Ф. Флюоресцирующие антитела и методы их применения, М., 1968, библиогр.; Петросян Е. А. Комплексные антигены тифо-паратифозной группы бактерий, М., 1961, библиогр.; Станиславский Е. С. Бактериальные структуры и их антигенность, М., 1971, библиогр.; H e у m e r В., S p a n e 1 R. a. Haferkamp O. Biologische Aktivitat bakterieller Zellwande, Immun. u. Infekt., Bd 3, S. 232, 1975; Luederitz O. a. o. Isolation and chemical and immunological characterization of bacterial lipopoly-saccharides, в кн.: Microbial toxins, ed. by Т. C. Montie, v. 4, p. 145, N. Y., 1971, bibliogr.; Owen P. a. Salton M. Antigenic and enzymatic architecture of Micrococcus lysodeikticus membranes established by crossed immunoelectrophoresis, Proc. nat. Acad. Sci. (Wash.), v. 72, p. 1711, 1975; Robbins J. B. a. o. Gross-reacting bacterial antigens and immunity to disease caused by encapsulated bacteria, в кн.: Immun. syst. a. infect. Dis., ed. by E. Ne-ter a. F. Milgrom, p. 218, Basel a. o., 1975; Wicken A. J. a. Knox K. W. Lipoteichoic acids, a new class of bacterial antigen, Science, v. 187, p. 1161, 1975.
B. С. Левашев; А. Г. Скавронская (ген. с табл.); Д. М. Гольдфарб (бакт. табл.). E. С. Станиславский.
Микробиология изучает строение, жизнедеятельность, условия жизни и развития мельчайших организмов, называемых микробами, или микроорганизмами.
«Невидимые, они постоянно сопровождают человека, вторгаясь в его жизнь то как друзья, то как враги», — сказал академик В. Л. Омельянский. Действительно, микробы есть везде: в воздухе, в воде и в почве, в организме человека и животных. Они могут быть полезны, и их используют в производстве многих пищевых продуктов. Они могут быть вредны, вызывать заболевания людей, порчу продуктов и др.
Микробы были открыты голландцем А. Левенгуком (1632-1723) в конце XVII в., когда он изготовил первые линзы, дававшие увеличение в 200 и более раз. Увиденный микромир поразил его, Левенгук описал и зарисовал микроорганизмы, обнаруженные им на различных объектах. Он положил начало описательному характеру новой науки. Открытия Луи Пастера (1822-1895) доказали, что микроорганизмы отличаются не только формой и строением, но и особенностями жизнедеятельности. Пастер установил, что дрожжи вызывают спиртовое брожение, а некоторые микробы способны вызывать заразные болезни людей и животных. Пастер вошел в историю как изобретатель метода вакцинации против бешенства и сибирской язвы. Всемирно известен вклад в микробиологию Р. Коха (1843-1910) — открыл возбудителей туберкулеза и холеры, И. И. Мечникова (1845-1916) — разработал фагоцитарную теорию иммунитета, основоположника вирусологии Д. И. Ивановского (1864-1920), Н. Ф. Гамалея (1859-1940) и многих других ученых.
Микробы — это мельчайшие, преимущественно одноклеточные живые организмы, видимые только в микроскоп. Размер микроорганизмов измеряется в микрометрах — мкм (1/1000 мм) и нанометрах — нм (1/1000 мкм).
Микробы характеризуются огромным разнообразием видов, отличающихся строением, свойствами, способностью существовать в различных условиях среды. Они могут быть одноклеточными, многоклеточными и неклеточными.
Микробы подразделяют на бактерии, вирусы и фаги, грибы, дрожжи. Отдельно выделяют разновидности бактерий — риккетсии, микоплазмы, особую группу составляют простейшие (протозои).
Бактерии — преимущественно одноклеточные микроорганизмы размером от десятых долей микрометра, например микоплазмы, до нескольких микрометров, а у спирохет — до 500 мкм.
Различают три основные формы бактерий — шаровидные (кокки), палочковидные (бациллы и др.), извитые (вибрионы, спирохеты, спириллы) (рис. 1).
Шаровидные бактерии (кокки) имеют обычно форму шара, но могут быть немного овальной или бобовидной формы. Кокки могут располагаться поодиночке (микрококки); попарно (диплококки); в виде цепочек (стрептококки) или виноградных гроздьев (стафилококки), пакетом (сарцины). Стрептококки могут вызывать ангину и рожистое воспаление, стафилококки — различные воспалительные и гнойные процессы.
Рис. 1. Формы бактерий: 1 — микрококки; 2 — стрептококки; 3 — сардины; 4 — палочки без спор; 5 — палочки со спорами (бациллы); 6 — вибрионы; 7- спирохеты; 8 — спириллы (с жгутиками); стафилококки
Палочковидные бактерии самые распространенные. Палочки могут быть одиночными, соединяться попарно (диплобактерии) или в цепочки (стрептобактерии). К палочковидным относятся кишечная палочка, возбудители сальмонеллеза, дизентерии, брюшного тифа, туберкулеза и др. Некоторые палочковидные бактерии обладают способностью при неблагоприятных условиях образовывать споры. Спорообразующие палочки называют бациллами. Бациллы, напоминающие по форме веретено, называют клостридиями.
Спорообразование представляет собой сложный процесс. Споры существенно отличаются от обычной бактериальной клетки. Они имеют плотную оболочку и очень малое количество воды, им не требуются питательные вещества, а размножение полностью прекращается. Споры способны длительно выдерживать высушивание, высокие и низкие температуры и могут находиться в жизнеспособном состоянии десятки и сотни лет (споры сибирской язвы, ботулизма, столбняка и др.). Попав в благоприятную среду, споры прорастают, т. е. превращаются в обычную вегетативную размножающуюся форму.
Извитые бактерии могут быть в виде запятой — вибрионы, с несколькими завитками — спириллы, в виде тонкой извитой палочки — спирохеты. К вибрионам относится возбудитель холеры, а возбудитель сифилиса — спирохета.
Бактериальная клетка имеет клеточную стенку (оболочку), часто покрытую слизью. Нередко слизь образует капсулу. Содержимое клетки (цитоплазму) отделяет от оболочки клеточная мембрана. Цитоплазма представляет собой прозрачную белковую массу, находящуюся в коллоидном состоянии. В цитоплазме находятся рибосомы, ядерный аппарат с молекулами ДНК, различные включения запасных питательных веществ (гликогена, жира и др.).
Микоплазмы — бактерии, лишенные клеточной стенки, нуждающиеся для своего развития в ростовых факторах, содержащихся в дрожжах.
Некоторые бактерии могут двигаться. Движение осуществляется с помощью жгутиков — тонких нитей разной длины, совершающих вращательные движения. Жгутики могут быть в виде одиночной длинной нити или в виде пучка, могут располагаться по всей поверхности бактерии. Жгутики есть у многих палочковидных бактерий и почти у всех изогнутых бактерий. Шаровидные бактерии, как правило, не имеют жгутиков, они неподвижны.
Размножаются бактерии делением на две части. Скорость деления может быть очень высокой (каждые 15-20 мин), при этом количество бактерий быстро возрастает. Такое быстрое деление наблюдается на пищевых продуктах и других субстратах, богатых питательными веществами.
Вирусы — особая группа микроорганизмов, не имеющих клеточного строения. Размеры вирусов измеряются нанометрами (8-150 нм), поэтому их можно увидеть только с помощью электронного микроскопа. Некоторые вирусы состоят только из белка и одной из нуклеиновых кислот (ДНК или РНК).
Вирусы вызывают такие распространенные болезни человека, как грипп, вирусный гепатит, корь, а также болезни животных — ящур, чуму животных и многие другие.
Вирусы бактерий называют бактериофагами , вирусы грибов — микофагами и т. п. Бактериофаги встречаются повсюду, где есть микроорганизмы. Фаги вызывают гибель микробной клетки и могут использоваться для лечения и профилактики некоторых инфекционных заболеваний.
Грибы являются особыми растительными организмами, которые не имеют хлорофилла и не синтезируют органические вещества, а нуждаются в готовых органических веществах. Поэтому грибы развиваются на различных субстратах, содержащих питательные вещества. Некоторые грибы способны вызывать болезни растений (рак и фитофтора картофеля и др.), насекомых, животных и человека.
Клетки грибов отличаются от бактериальных наличием ядер и вакуолей и похожи на растительные клетки. Чаще всего они имеют форму длинных и ветвящихся или переплетающихся нитей — гифов. Из гифов образуется мицелий, или грибница. Мицелий может состоять из клеток с одним или несколькими ядрами или быть неклеточным, представляя собой одну гигантскую многоядерную клетку. На мицелии развиваются плодовые тела. Тело некоторых грибов может состоять из одиночных клеток, без образования мицелия (дрожжи и др.).
Грибы могут размножаться разными путями, в том числе вегетативным путем в результате деления гиф. Большинство грибов размножаются бесполым и половым путями при помощи образования специальных клеток размножения — спор. Споры, как правило, способны длительно сохраняться во внешней среде. Созревшие споры могут переноситься на значительные расстояния. Попадая в питательную среду, споры быстро развиваются в гифы.
Обширную группу грибов представляют плесневые грибы (рис. 2). Широко распространенные в природе, они могут расти на пищевых продуктах, образуя хорошо видные налеты разной окраски. Причиной порчи продуктов часто являются мукоровые грибы, образующие пушистую белую или серую массу. Мукоровый гриб ризопус вызывает «мягкую гниль» овощей и ягод, а гриб ботритис покрывает налетом и размягчает яблоки, груши и ягоды. Возбудителями плесневения продуктов могут быть грибы из рода пениииллиум.
Отдельные виды грибов способны не только приводить к порче продуктов, но и вырабатывать токсические для человека вещества — микотоксины. К ним относятся некоторые виды грибов рода аспергиллус, рода фузариум и др.
Полезные свойства отдельных видов грибов используют в пищевой и фармацевтической промышленности и других производствах. Например, грибы рода пениииллиум применяются для получения антибиотика пенициллина и в производстве сыров (рокфора и камамбера), грибы рода аспергиллус — в производстве лимонной кислоты и многих ферментных препаратов.
Актиномицеты — микроорганизмы, имеющие признаки и бактерий, и грибов. По строению и биохимическим свойствам актиномицеты аналогичны бактериям, а по характеру размножения, способности образовывать гифы и мицелий похожи на грибы.
Рис. 2. Виды плесневых грибов: 1 — пениииллиум; 2- аспергиллус; 3 — мукор.
Дрожжи — одноклеточные неподвижные микроорганизмы размером не более 10-15 мкм. Форма клетки дрожжей бывает чаще круглой или овальной, реже палочковидной, серповидной или похожей на лимон. Клетки дрожжей своим строением похожи на грибы, они также имеют ядро и вакуоли. Размножение дрожжей происходит почкованием, делением или спорами.
Дрожжи широко распространены в природе, их можно обнаружить в почве и на растениях, на пищевых продуктах и различных отходах производства, содержащих сахара. Развитие дрожжей в пищевых продуктах может приводить к их порче, вызывая брожение или закисание. Некоторые виды дрожжей обладают способностью превращать сахар в этиловый спирт и углекислый газ. Этот процесс называется спиртовым брожением и широко используется в пищевой промышленности и виноделии.
Некоторые виды дрожжей кандида вызывают заболевание человека — кандидоз.